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携带IKK2dn基因重组腺病毒载体的构建及表达验证的开题报告

摘要

腺病毒（Ad）作为一种广泛应用于基因治疗领域的载体，在临床前研究中显示出了很高的应用价值。其中，纤维素合成酶-2（IKK2）在调节炎症反应、免疫应答以及细胞凋亡等方面发挥着重要作用。本研究通过构建携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体，用于IKK2抑制后对免疫球蛋白IgG生产和分泌的影响，为克服IgG介导的自身免疫疾病提供理论和实验基础。

本研究以载体pAdTrack-CMV为基础，构建了携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体。经序列检测和酶切鉴定，证实所构建的IKK2dn载体基因序列正确，并正确插入至载体中。同时，采用Westernblotting技术对IKK2抑制基因的表达进行验证，结果表明构建的载体可以成功表达IKK2dn基因，并达到较高表达水平。进一步地，将携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体转染至B细胞株SP2/0中，通过ELISA和免疫荧光技术检测IgG的生产和分泌情况，并对比对照组和IKK2dn载体组，分析IKK2dn对IgG的调控作用。

综上所述，本研究成功构建了携带IKK2dn基因的重组腺病毒载体，并利用Westernblotting技术对其表达进行了验证。随后，将IKK2dn载体转染至B细胞株SP2/0中，验证了IKK2对IgG生产和分泌的调控作用。这些结果为克服IgG介导的自身免疫疾病提供了理论和实验基础，具有重要的意义。

关键词：腺病毒；IKK2dn基因；重组载体；IgG；基因治疗

Abstract

Asavectorwidelyusedingenetherapyfield,adenovirus(Ad)hasshowngreatapplicationvalueinpreclinicalstudies.Amongthem,IκBkinase2(IKK2)playsanimportantroleinregulatinginflammatoryresponses,immuneresponsesandcellapoptosis.Inthisstudy,arecombinantadenovirusvectorcarryingtheIKK2dngenewasconstructedtostudytheeffectofIKK2inhibitiononimmunoglobulinI(IgG)productionandsecretion,whichprovidesatheoreticalandexperimentalbasisforovercomingIgG-mediatedautoimmunediseases.

BasedonthepAdTrack-CMVvector,arecombinantadenovirusvectorcarryingtheIKK2dngenewasconstructed.ThesequencedetectionandenzymaticidentificationconfirmedthattheconstructedIKK2dnvectorgenesequencewascorrectandwascorrectlyinsertedintothevector.WesternblottingwasusedtoverifytheexpressionoftheIKK2inhibitiongene,andtheresultsshowedthattheconstructedvectorcouldsuccessfullyexpresstheIKK2dngeneandreachahighexpressionlevel.Furthermore,therecombinantadenovirusvectorcarryingtheIKK2dngenewastransfectedintotheB-celllineSP2/0,andIgGproductionandsecretionweredetectedbyELISAandimmunofluorescencetechniques,andtheeffectsofIKK2dnonIgGwerecomparedwiththecontrolgroup.

Inconclusion,wesuccessfullyconstructedarec