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PTEN基因重组腺病毒对人气道平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制的探讨的开题报告

一、研究背景

气道平滑肌细胞(proliferationofairwaysmoothmusclecells,ASMCs)是支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病以及肺癌等肺部疾病的发病核心。其中，在这些疾病中ASMCs的异常增殖对疾病发展起到重要的作用。目前，虽然有许多治疗策略尚在不断研究，但对于ASMCs过度增殖的治疗仍有待于深入研究和探讨。

已有研究表明，肺癌和哮喘等疾病的发生与PTEN(磷脂酰肌醇3-激酶)基因的表达下调有关。PTEN是一个重要的肿瘤抑制基因，能够抑制PI3K/Akt通路，减少ASMCs的增殖。因此，对PTEN基因的研究对于探索ASMCs过度增殖的分子机制，以及开发有效的治疗方法具有重要的意义。

二、研究目的

本研究拟探讨PTEN基因重组腺病毒对人气道平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。具体研究内容包括：

1.构建PTEN基因重组腺病毒，并鉴定其的表达情况。

2.通过细胞增殖实验，探究PTEN基因重组腺病毒对ASMCs增殖的影响。

3.通过Westernblotting和RT-PCR等技术方法，分析PTEN基因重组腺病毒在ASMCs中PI3K/Akt信号通路的调控作用。

三、研究方法

1.构建PTEN基因重组腺病毒并检测表达情况。

在pAdTrack-CMV表达载体中克隆PTEN基因，并将其转入到pAdEasy-1质粒中进行重组腺病毒的构建。通过细胞培养，收获初代腺病毒，经过三轮扩增后，检测表达情况。

2.细胞增殖实验

取人气道平滑肌细胞，以不同的病毒MOI(感染病毒的多样性)和时间作用于ASMCs，通过MTT和细胞计数法，检测病毒对ASMCs增殖的影响。

3.Westernblotting实验

挑选病毒感染前后不同时间点的ASMCs，用Westernblotting检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的变化。

四、预期结果

1.成功构建PTEN基因重组腺病毒并鉴定其在ASMCs中的表达情况。

2.PTEN基因重组腺病毒能够抑制ASMCs的增殖，并且其抑制作用与剂量和时间有关。

3.PTEN基因重组腺病毒可以通过调节PI3K/Akt信号通路，来抑制ASMCs的增殖。

五、研究意义

本研究将对探究ASMCs的增殖分子机制，以及寻找新型治疗方法具有重要的意义。如果证明PTEN基因重组腺病毒能够明显抑制ASMCs的增殖，这将是一个潜在的、低毒性的、基因治疗的策略，可预期广泛应用于肺部疾病的治愈及预防中，同时也为探究下调PTEN导致的肺部疾病提供了新的研究思路。