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杆状病毒AcMNPVorf109基因功能研究的开题报告

一、研究背景

AcMNPV（Autographacalifornicamultiplenuclearpolyhedrosisvirus）是杆状病毒科（Baculoviridae）中重要的一员，常被用作昆虫杀虫剂。其基因组在哺乳动物细胞中表达后，能够表达多个功能蛋白质。其中orf109基因编码的蛋白质是一种结构不稳定的小分子，由30个氨基酸组成，与病毒生命周期的不同阶段相关。

然而，目前对于orf109基因的功能研究还不够深入，需要在遗传、分子生物学等方面进行深入的研究。

二、研究目的

本研究旨在通过建立orf109基因敲除的AcMNPV株，探索该基因在病毒感染和复制过程中的功能，为进一步阐明AcMNPV的基因调控机制提供有力支持。

三、研究内容

1.构建orf109基因敲除的AcMNPV株

采用CRISPR/Cas9技术，通过在orf109基因序列内引入特定的双链断裂，实现对该基因的敲除。

2.病毒复制动力学研究

对比orf109基因敲除的AcMNPV株与野生型AcMNPV株在细胞感染和复制过程中的差异，分析orf109基因在病毒复制过程中的功能调控机制，进一步阐明AcMNPV的基因调控机制。

3.远程调控机制研究

通过建立简单的元件及转录因子的功能测定体系，研究orf109基因与其他病毒基因之间的相互作用关系，深入探究其远程调控机制。

四、研究意义及预期结果

通过对orf109基因的功能研究，可以加深对AcMNPV生命周期和基因调控机制的认识，为其进一步应用于病毒生物学研究提供科学依据。同时，还可以为病毒杀虫剂的开发提供理论支持。预期的研究结果包括：

1.确定orf109基因在病毒复制过程中的关键作用。

2.揭示orf109基因与其他病毒基因之间相互关系的远程调控机制。

3.为进一步深入研究AcMNPV基因调控机制和病毒生命周期提供理论依据。

四、研究计划

时间节点研究内容

2021.9-2022.3初步设计构建orf109基因敲除的AcMNPV株，并鉴定

2022.3-2022.9获得敲除的AcMNPV株并对其进行鉴定

2022.9-2023.3对比敲除株与野生型株在感染过程中的差异

2023.3-2024.2研究orf109基因的远程调控机制

2024.2-2024.8撰写论文并进行报告

五、研究经费预算

本研究所需要的经费预算如下：

类别经费预算（万元）

实验材料费6

设备购置费3

差旅费和会议费2

人员经费10

共计21万元