肿瘤微环境CAFs中GPER介导能量代谢重塑调控三阴性乳腺癌免疫逃逸的作用与机制研究.pdf

摘要

摘要

三阴性乳腺癌是乳腺癌中一类预后较差的亚型，目前尚无有效的治疗靶点。

G蛋白偶联雌激素受体（GPER）作为一种新型雌激素受体，可以介导三阴性乳

腺癌（TNBC）细胞的雌激素作用，促进肿瘤的恶性进展及药物耐药。然而，GPER

在肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）中的作用尚不清楚，而同时CAFs又是肿瘤微

环境中的主要细胞成分。本研究将探索GPER在三阴性乳腺癌中通过调控肿瘤

微环境影响三阴性乳腺癌进展及免疫逃逸的分子机制。

第一部分：晚期三阴性乳腺癌微环境CAFs中GPER的表达及其临

床意义

目的：探索乳腺癌微环境中CAFs上GPER的表达情况及其与PD-L1表达、

临床病理变量间的相关性。

方法：应用免疫组织化学检测91例已接受PD-1/PD-L1抑制剂免疫治疗的

TNBC患者组织标本。分析这些组织中肿瘤间质GPER、肿瘤实质GPER及肿瘤

实质PD-L1表达情况及其之间的相关性。将GPER的表达与患者的临床信息结

合，使用Kaplan-Meier分析肿瘤实质GPER、肿瘤间质GPER表达高低与患者接

受PD-1/PD-L1抑制剂治疗后无疾病进展生存时间（PFS）的关系。使用单因素

及多因素Cox回归探索患者接受PD-1/PD-L1抑制剂之后PFS的影响因素。

结果：（1）GPER在肿瘤间质表达高低与肿瘤大小（T）、区域淋巴结转移

（N）、病理分期显著相关（p＜0.05）；与患者年龄、月经状态、肿块部位及组

织学分级无明显统计学相关性（p＞0.05）；（2）GPER在肿瘤实质中表达高低

与年龄、肿瘤大小（T）、区域淋巴结转移（N）、病理分期、月经状态、组织

学分级及肿块部位无明显统计学相关性（p＞0.05）；（3）通过Spearman相关

性分析，发现肿瘤间质GPER表达与肿瘤实质PD-L1表达呈正相关（p0.001，

R=0.724）；肿瘤实质GPER表达与肿瘤实质PD-L1表达呈正相关，但是统计学

无意义（p=0.074,R=0.188）；4）以间质GPERIHC评分将患者分高低两组，

两组患者的中位PFS有明显统计学（p0.001），两组患者中位PFS时间相距

II

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120天（145天vs.265天）；而以实质GPERIHC评分将患者分高低两组时，两

组患者的PFS无明显统计学（p=0.675）,两组患者中位无进展生存时间差异80

天（225天vs.145天）；5)GPER间质表达水平是晚期三阴性乳腺癌患者接受

PD-1/PD-L1抑制剂治疗后，影响患者PFS的独立危险因素。

结论：GPER肿瘤间质表达高低是晚期三阴性乳腺癌患者接受PD-1/PD-L1

抑制剂治疗后PFS的独立危险因素。

关键词：三阴性乳腺癌，GPER，免疫耐受，PD-L1

第二部分：细胞质GPER介导肿瘤相关成纤维细胞与肿瘤细胞相交

互并促进乳腺癌进展的分子机制

目的：探索肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）中GPER调控三阴性乳腺癌（TNBC）

增殖、凋亡及侵袭的分子机制

方法：使用TNBC细胞与CAFs细胞共培养系统，通过E2及G15等药物激

活或抑制CAFs中GPER的功能。使用免疫印迹法检测信号通路轴中相关蛋白改

变情况，使用CCK-8、流式细胞术及侵袭实验检测TNBC细胞增殖、凋亡及侵

袭情况。相关试剂盒检测葡萄糖消耗量、乳酸、丙酮酸、谷氨酰胺、ATP、乙酰

辅酶A、琥珀酸生成量。使用染色质免疫共沉淀（ChIP）实验检测GLUL转录

因子结合情况。原位异种移植瘤实验和肺转移瘤实验检测在体外模型中，CAFs

上GPER对TNBC的生物学效应。

结果：（1）E2（GPER激活剂）激活CAFs细胞质GPER