菜花(花椰莱)中核酸的分离和鉴定.docVIP

菜花(花椰莱)中核酸的分离和鉴定

实验二菜花(花椰莱)中核酸的分离和鉴定

一、目的

初步掌握从菜花中分离核酸的方法，和RNA、DNA的定性检定。

二、原理

用冰冷的稀三氯乙酸或稀高氯酸溶液在低温下抽提菜花匀浆，以除去酸溶性小分子等物质。再用有机溶剂，如乙醇、乙醇等抽提，去掉脂溶性的磷脂等物质。最后用浓盐溶液(10,氯化钠溶液)和0.5摩尔,升高氯酸(70?)分别提取DNA和RNA，再进行定性检定。

由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应，经显色后所呈现的颜色深浅在一定范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比，因此可用定糖法来定性定量测定核酸。

1(核糖的测定:测定核糖的常用方法是苔黑酚(即3,5-二羟甲苯)法(Oreinol反应)。当含有核糖的RNA与浓盐酸及3,5-二羟甲苯在沸水浴中加热l(10,20分钟后，有绿色物产生，这是因为RNA脱瞟吟后的核糖与酸作用生成糠醛，后者再与3,5-二羟甲苯作用产生绿色物质。

DNA、蛋白质和粘多糖等物质对测定有干扰作用。

2(脱氧核糖的测定:测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。含有脱氧核糖的DNA在酸性条件下和二苯胺在沸水浴中共热10分钟后，产生蓝色。这是因为DNA嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-6-酮基戍醛，它再和二苯胺作用产生蓝色物质。

此法易受多种糖类及其衍生物和蛋白质的干扰。

上述两种定糖的方法准确性较差