骨形态发生蛋白-9和P-15多肽共修饰的PLGA三维支架在兔骨缺损修复的应用研究.pdf

摘要

摘要

目的：

利用三维打印制备聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架，再用含有骨形态发生蛋

白-9(BMP-9)和P-15多肽的水凝胶对支架进行修饰，观察支架复合物的结构及

作用效果，并通过分析骨组织相关蛋白的表达来评价其在兔骨缺损修复中的应

用

方法：

1、通过熔融沉积法制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物三维支架，利用电子显微

镜观察支架的空间结构，并用X-射线衍射仪、体外降解率和抗压强度对其进行

相关表征;

2、制备含有BMP-9和P-15的水凝胶，用流式细胞仪检测不同含肽量组的细

胞凋亡率，用电子显微镜观察细胞与支架的粘附性;

3、为了分析支架复合物的作用效果，利用免疫印迹法检测碱性磷酸酶

(ALP)、1型胶原蛋白(Col-I)、骨钙素(OCN)、RUNT相关转录因子2(RUNX2)和

成骨相关转录因子(SP7)的表达;

4、构建骨缺损模型，应用Micro-CT观察实验组和对照组中新骨形成情

况，并检测骨组织相关蛋白在兔子骨缺损模型中的表达;

结果：

1、3D打印支架为圆柱形多孔结构，支架内径约1mm，孔隙率良好，衍射

峰分布较广，表明3D打印只涉及物理变化，不改变材料的性能，同时支架的

2

降解率为9.38%，吸水率约为9.09%，抗压强度为15.83N/mm，满足生物支架

的性能要求；

2、在测定细胞凋亡率的实验中，将骨髓间充质干细胞与支架的共培养，可

以发现2%的多肽组对骨髓间充质干细胞的诱导分化效果最为明显。而流式细

胞仪检测显示，与对照组相比，0%和2%组均未引起明显的细胞凋亡。含2%和

4%多肽的支架可促进BMSCs中ALP、Col-1、OCN、RUNX2和SP7的表达；

3、体内实验显示，与对照组相比，2%多肽支架组碱性磷酸酶、Col-1、

OCN、RUNX2、SP7蛋白的表达显著增加；

4、Micro-CT检测表明，相较于其他实验组和对照组，2%多肽支架在骨缺

II

摘要

损模型中具有良好的骨修复能力；

结论：

骨形态发生蛋白-9和P-15多肽水凝胶修饰的PLGA三维支架材料具有良好

的生物相容性、机械性能和成骨性，可以诱导新骨生成，用于大尺寸骨缺损的

修复和治疗是可行的。

关键词：骨形态发生蛋白-9；P-15多肽；三维生物打印；聚乳酸-羟基乙酸支

架；骨髓间充质干细胞；骨修复；

III

ABSTRACT

ABSTRACT

Purpose:

Three-dimensionalprintedpolylacticacid-glycolicacid(PLGA)scaffoldwas

prepared,andthenbonemorphogeneticprotein-9(BMP-9)andP-15polypeptide

hydrogelwereusedtomodifythescaffold,analyzethestructureandeffectofthe

stentcomplex,andevaluateitsapplicationintherepairofrabbitbonedefects.

Method:

1.Preparationofthree-dimensionalscaffoldsofpolylacticacidhydroxyacetic

acidcopolymerbymeltdepositionmeth