植物基因工程技术及应用.ppt

（5）农杆菌介导几乎所有的双子叶植物尤其是豆科类植物的根部常常会形成根瘤，这是由于植物根部被一种革兰氏阴性土壤杆菌农杆根瘤菌（A.tumefaciens）感染所致，其致瘤特性是由该菌细胞内的野生型质粒Ti介导的。第31页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三二元整合转化程序将外源基因克隆在大肠杆菌-农杆菌穿梭质粒的T-DNA区内；重组质粒直接转化农杆菌株，该菌株携带只含vir区不含T-DNA区的Ti辅助质粒；第32页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三（2）农杆菌介导外源基因转移技术的一般操作①将表面消毒的叶片切成小块②小块在过夜培养并稀释到一定浓度的含外源基因的根癌农杆菌液中共培养几分钟，使让根癌农杆菌感染叶片切块的伤口。③从菌液中捞出小叶块，培养基中培养2天。④在含头孢霉素选择培养基中筛选转化细胞。继续培养，转化的细胞分化出芽。⑤将芽转入含有抗生素的生根培养基上，诱导生根。⑥将完整的转基因植株移栽到土壤中。第33页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三abcd第34页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三分子鉴定:PCRSouthernblotNorthernblotWesternblot蛋白质电泳5.转基因植株的鉴定及分析第35页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三Southernblot第36页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三Northernblot

第37页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三Westernblot和蛋白质电泳第38页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三（三）转基因生物商业化的一般流程

1.实验室试验环节：通过了实验室的试验，技术成熟之后才开始进行中间试验环节。2.中间试验环节：这个环节在田间进行，一般需要两年左右的时间。田间的管理评价包括具体位置、与人群的距离、面积、隔离等多项具体规定。

3.环境释放评价：需要两年。在这个环节试验可以再扩大一些面积，但也有很多要求，也必须在相对封闭的环境下进行。

4.生产试验：生产试验的规模可以进一步扩大。本阶段的评价主要是评估转基因生物对环境是否有影响和压力。5.如果要做食品，需要再对独立性、致敏性、抗营养因子等进行评价，还需要提交综合性评价。”

按照中国现行的批准流程，转基因商业化的批准有年限控制，一般时限是4年。4年到期后，需要重新报批。

第39页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三（四）种植转基因植物的风险性破坏生态环境和影响人类的健康。1.安全性问题转基因植物存在的用于选择性标记的抗生素，以及导入植物的DNA序列在加工过程中可能出现的改变。2.环境及生态问题导入植物的目的基因是否转入其他植物，是否会破坏生态平衡。第40页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三首先是毒性问题。一些研究学者认为，对于基因的人工提炼和添加，可能在达到某些人们想达到的效果的同时，也增加和积聚了食物中原有的微量毒素。

其次是过敏反应问题。对于一种食物过敏的人有时还会对一种以前他们不过敏的食物产生过敏，比如：科学家将玉米的某一段基因加入到核桃、小麦和贝类动物的基因中，蛋白质也随基因加了进去，那么，以前吃玉米过敏的人就可能对这些核桃、小麦和贝类食品过敏。

第三是营养问题。科学家们认为外来基因会以一种人们目前还不甚了解的方式破坏食物中的营养成分。

第四是对抗生素的抵抗作用。当科学家把一个外来基因加入到植物或细菌中去，这个基因会与别的基因连接在一起。人们在服用了这种改良食物后，食物会在人体内将抗药性基因传给致病的细菌，使人体产生抗药性。

第五是对环境的威胁。在许多基因改良品种中包含有从杆菌中提取出来的细菌基因，这种基因会产生一种对昆虫和害虫有毒的蛋白质。在一次实验室研究中，一种蝴蝶的幼虫在吃了含杆菌基因的马利筋属植物的花粉之后，产生了死亡或不正常发育的现象，这引起了生态学家们的另一种担心，那些不在改良范围之内的其它物种有可能成为改良物种的受害者。

最后，生物学家们担心为了培养一些更具优良特性，比如说具有更强的抗病虫害能力和抗旱能力等，而对农作物进行的改良，其特性很可能会通过花粉等媒介传播给野生物种。第41页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三③“三明治”事件由含有抗虫性Bt基因的转基因玉米做成。这种玉米可产生一种Cryge蛋白质，此物是一潜