核酸杂交原理课件.pptVIP

;一、杂交的根本原理;DNA探针：是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板，人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段，可用来快速检测病原体。;一、核酸分子杂交的根本原理与分类

〔一〕核酸分子杂交的根本原理

1、变性〔denaturation〕

〔1〕定义：

在一定的条件下，双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成无规那么线团，双链解链成为单链。

;〔2〕.引起核酸变性的因素;;;;〔1〕制备样品：首先需要从待检测组织样品提取DNA或RNA。

〔2〕制备探针：探针是指一段能和待检测核酸分子依碱基配对原那么而结合的核酸片段。

〔3〕预杂交和杂交

〔4〕检测杂交结果;二、核酸探针

〔一〕探针的概念

探针〔probe〕

指能与特定靶分子发生特异性相互作用，并能被特殊方法所检测的分子。

例如抗原-抗体、生物素-亲和素等均可看成是探针与靶分子的相互作用。

DNA探针将一段序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合，经放射自显影或其他检测手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。

;〔二〕探针种类和选择

1.探针种类

〔1〕基因组DNA探针

为某一基因的全部或局部序列，或某一非编码序列。

〔2〕cDNA探针

以mRNA为模板经逆转录酶催化产生的互补