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四川乐至贵均卫生材料有限公司

医疗器械产品无菌检测方法

目的

建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进行无菌检测，以确定灭菌的有效性。

范围

本规程适用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。

依据

《中国药典》2015版

设备、器皿、药品的准备

设备的准备

电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯

器皿的准备

锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（Ф90mm

×15mm）、斜口钳、玻璃棒。

药品的准备

硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、纯化水、pH7.0无菌氯化钠溶液。

器皿的清洗

将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。

取样

按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品

培养基的制备

硫乙醇酸盐流体培养基的制备

取15g硫乙醇酸盐流体培养基和1000ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至45℃待用。

胰酪大豆胨液体培养基的制备

取15g胰酪大豆胨和1000ml纯化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。

培养基灵敏度检查

菌种的要求

培养基灵敏度检查所用的菌株（金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌）传代次数不得超过

5代。

菌液的制备

接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35℃培养24小时；接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上，20-25℃培养24小时。

将上述经24小时培养后的培养物用0.9﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于

100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。制备好的菌液应在2-8℃条件下保存，并在24小时内使用。

接种及培养

取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养3天逐日观察并记录。

取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25℃培养5天，逐日观察记录。

灵敏度检测结果判断

空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基试管菌落均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。

供试品的无菌检测

对照试验

取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养14天逐日观察并记录。

取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌，另1支不接种作为空白对照，20-25℃培养14天，逐日观察记录。

供试品的准备及接种

于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段（2～3cm）,其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中，另外2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量胰酪大豆胨液体培养基中，冷却。

9.2 培养

将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中30～35℃条件下培养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录；

将接种过的胰酪大豆胨液体培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中20～25℃条件下培养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录。

供试品无菌检测结果判定

若上述接种后的培养基经14天培养后均无菌落生长，则可判定供试液为无菌，即为合格；反之，则为不合格。

无菌检测报告（见附表1）

无菌检测报告

检测依据样品数量样品名称

《中国药典》2015版 检测日期样品批号样品规格

培养基的灵敏度检测

硫乙醇酸盐流体培养基（培养3天）

胰酪大豆胨培养基（培养5天）

培养天数

1

接种金黄色葡萄球菌 接种金黄色葡萄球菌

空白

接种枯草芽孢杆菌 接种枯草芽孢杆菌

空白

2

3

4

5

结论：

日期：

供试品的无菌检测

培养 硫乙醇酸盐流体培养基（培养14天） 改良马丁培养基（培养14天）

天数

金黄色葡萄球菌

样品1

样品2

空白

白色念珠菌

样品3

样品4

空白

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

结论：

报告日期：

备注

检测者

“+”表示有菌生长；“-”表示无菌生长；

培养基的灵敏度检测中空白试验应无菌生长，接种过