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重组P170、FLT3原核表达及多克隆抗体制备的开题报告

一、研究背景和意义

FLT3（fms-liketyrosinekinase3）是一种酪氨酸激酶受体，在多种白血病中高度表达，包括急性髓系白血病（AML）、急性淋巴细胞性白血病（ALL）和慢性髓性白血病（CML）。研究表明，FLT3与白血病的发生和发展密切相关，因此，对FLT3进行深入的研究有助于揭示白血病的发病机制和寻找治疗白血病的新方法。

在研究FLT3的过程中，常常需要对其进行原核表达和制备多克隆抗体，以便进行各种分子生物学和免疫学实验。因此，本文将介绍如何通过重组技术制备P170-FLT3的原核表达体和多克隆抗体，为进一步研究FLT3的功能和调节机制奠定基础。

二、研究内容

1.重组P170-FLT3的构建

首先，需要将人FLT3的编码序列克隆到重组表达载体pET28a(+)上。随后，在pET28a(+)的N端添加His6标签，方便后续的蛋白纯化。接着，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白的表达。

2.P170-FLT3的纯化和鉴定

通过尿素和肝素的复合溶液在亲和层析和凝胶过滤层析流程下，纯化重组P170-FLT3。利用半定量Westernblot技术检测蛋白纯化效果，并通过质谱鉴定蛋白质的分子量。

3.P170-FLT3的免疫原性评价

将制备好的P170-FLT3充分混合药典注明的佐剂，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并通过ELISA技术检测抗体的效价。

三、研究意义

本研究的主要意义在于，通过重组技术制备P170-FLT3的原核表达体和多克隆抗体，为后续相关的分子生物学和免疫学实验奠定基础。此外，研究还有助于揭示FLT3在白血病发病和进展中的作用机制，并为治疗白血病开发新的靶向策略提供理论依据。