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重组疫苗E.coliLLO/WT1诱导人树突状细胞成熟及T细胞溶瘤作用研究的开题报告

一、研究背景及意义

E.coliLLO/WT1重组疫苗是一种结合了大肠杆菌外毒素（LLO）和WT1抗原的疫苗，可以诱导机体免疫系统产生针对WT1抗原的免疫反应，从而起到抗肿瘤作用。然而，该疫苗的免疫原性和安全性方面还有待进一步研究和提高。近年来研究表明，树突状细胞（DCs）作为免疫系统的重要成分，可以促进T细胞的免疫应答，进一步提高免疫效果。因此，本研究旨在探究E.coliLLO/WT1重组疫苗对DCs的成熟作用及其在适当条件下对T细胞的溶瘤作用，为该疫苗的免疫治疗提供理论指导和实践基础。

二、研究目的及内容

研究目的：探究E.coliLLO/WT1重组疫苗对DCs的成熟作用及其在适当条件下对T细胞的溶瘤作用，为该疫苗的免疫治疗提供理论指导和实践基础。

研究内容：

（1）构建E.coliLLO/WT1重组疫苗；

（2）以人外周血单个核细胞（PBMCs）作为DCs来源，体外培养DCs，并检测E.coliLLO/WT1重组疫苗对其成熟的影响；

（3）采用浮游细胞分离技术，分离出PBMCs中的T细胞，并培养至菌落形成期后，添加E.coliLLO/WT1重组疫苗，检测疫苗对T细胞的溶瘤作用；

（4）分析E.coliLLO/WT1重组疫苗对DCs成熟及T细胞溶瘤作用的影响机制。

三、研究方法和技术路线

（1）构建E.coliLLO/WT1重组疫苗：通过PCR扩增LLO和WT1基因，将两者连接并插入大肠杆菌载体中，经过菌落PCR、酶切、测序、蛋白表达等步骤获得E.coliLLO/WT1重组疫苗。

（2）DCs培养及成熟：以人PBMCs为材料，通过负附着法分离PBMCs中的单个核细胞，即DCs，将其体外培养并添加E.coliLLO/WT1重组疫苗，分别于12h、24h、48h后检测DCs成熟的标志分子（CD80、CD86、CD40、MHCII）的表达情况。

（3）T细胞培养及溶瘤实验：采用浮游细胞分离技术从PBMCs中分离T细胞，将其在96孔板内培养，待其菌落形成后，添加E.coliLLO/WT1重组疫苗，测定溶瘤率。

（4）分析E.coliLLO/WT1重组疫苗对DCs成熟及T细胞溶瘤作用的影响机制：利用相关荧光染料及ELISA法等手段，分析DCs成熟及T细胞溶瘤作用的影响机制。

四、研究预期结果及意义

预期结果：

（1）成功构建E.coliLLO/WT1重组疫苗；

（2）发现E.coliLLO/WT1重组疫苗能够促进DCs成熟，从而增强其对WT1所派生抗原表达的细胞的识别和清除能力；

（3）发现E.coliLLO/WT1重组疫苗能够在适当条件下诱导T细胞溶瘤作用；

（4）揭示了E.coliLLO/WT1重组疫苗对DCs成熟及T细胞溶瘤作用的影响机制。

意义：

本研究能够为深入理解E.coliLLO/WT1重组疫苗在免疫治疗中的作用机制提供理论依据，为该疫苗的临床应用提供新的思路和策略。同时，本研究对于探求免疫治疗的新方法、新途径具有重要的参考和启示作用。