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T/CIETXXX—2024

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附录A

（规范性）

有机硒检验方法

A.1基本原理

有机硒在蛋白酶合适的条件下酶解，以小分子的硒代氨基酸的形式释放出来，再通过液相色谱分离

系统进行组分分离后，电感耦合等离子体质谱仪测定，以保留时间和质荷比定性，峰面积外标法定量

A.2试剂和材料

除另有说明，本试验使用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水。

A.2.1甲醇(CHOH)；

3

A.2.2三氟乙酸(CHF0)；

232

A.2.32-(N-吗啉代)乙烷磺酸(CHNOS·H20,MES)；

6134

A.2.4氢氧化钠(Na0H)；

A.2.5盐酸(HCL):36%；

A.2.6三羟甲基氨基甲烷(CHNO,TRIS)；

4113

A.2.7蛋白酶液：CAS9014-01-1，IUB3.2.21.14，300U/mL～400U/mL，不得含丙三醇稳定剂，

于0℃～5℃冰箱储存。

A.2.8冰乙酸。

A.2.9乙酸溶液(3mol/L):取86mL冰乙酸，加入200mL水，混匀后定容至500mL。

A.2.10流动相溶液：98%三氟乙酸水溶液(0.2%v/v)-2%甲醇：取3.92mL三氟乙酸，加入1000mL一级水，

再加入40mL甲醇，最后用一级水定容至2000mL，过0.45μm有机系滤膜，超声脱气10min。

A.2.11氢氧化钠溶液(1mol/L)：称取4g氢氧化钠，用水稀释至100mL，混匀。

A.2.12氢氧化钠溶液(6mol/L)：称取24g氢氧化钠，用水稀释至100mL，混匀。

A.2.13盐酸溶液(1mol/L)：取8.33mL盐酸，用水稀释至100mL，混匀。

A.2.140.05mol/LMES-TRIS缓冲液：称取19.52g2-(N-吗啉代)乙烷磺酸和12.20g三羟甲基氨基甲烷，

用1.7L水溶解，20°C时用6mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8.3，加水稀释至2L。

A.2.15蛋白酶溶液：用0.05mol/LMES-TRIS缓冲溶液配置成为50mg/mL的蛋白酶溶液，使用前现配并

于0℃～5℃暂存。

A.2.16有机系滤膜：0.45μm；

A.2.17氩气或液氩：纯度≥99.99%；

A.2.18氦气：纯度≥99.99%。

A.3标准品

A.3.1硒代胱氨酸(SeCys，CHNOSe，M=334.09，CAS号：29621-88-3)：纯度≥98%，或采用经国家

2612242

认证并授予标准物质证书的单标准贮备液。

A.3.2甲基-硒代半胱氨酸(L-SeMc，CHNOSe，M=182.08，CAS号：26046-90-2)：纯度≥98%，或采用

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