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T/CIETXXX—2024
A
A
附录A
(规范性)
有机硒检验方法
A.1基本原理
有机硒在蛋白酶合适的条件下酶解,以小分子的硒代氨基酸的形式释放出来,再通过液相色谱分离
系统进行组分分离后,电感耦合等离子体质谱仪测定,以保留时间和质荷比定性,峰面积外标法定量
A.2试剂和材料
除另有说明,本试验使用试剂均为分析纯,水为GB/T6682中规定的一级水。
A.2.1甲醇(CHOH);
3
A.2.2三氟乙酸(CHF0);
232
A.2.32-(N-吗啉代)乙烷磺酸(CHNOS·H20,MES);
6134
A.2.4氢氧化钠(Na0H);
A.2.5盐酸(HCL):36%;
A.2.6三羟甲基氨基甲烷(CHNO,TRIS);
4113
A.2.7蛋白酶液:CAS9014-01-1,IUB3.2.21.14,300U/mL~400U/mL,不得含丙三醇稳定剂,
于0℃~5℃冰箱储存。
A.2.8冰乙酸。
A.2.9乙酸溶液(3mol/L):取86mL冰乙酸,加入200mL水,混匀后定容至500mL。
A.2.10流动相溶液:98%三氟乙酸水溶液(0.2%v/v)-2%甲醇:取3.92mL三氟乙酸,加入1000mL一级水,
再加入40mL甲醇,最后用一级水定容至2000mL,过0.45μm有机系滤膜,超声脱气10min。
A.2.11氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4g氢氧化钠,用水稀释至100mL,混匀。
A.2.12氢氧化钠溶液(6mol/L):称取24g氢氧化钠,用水稀释至100mL,混匀。
A.2.13盐酸溶液(1mol/L):取8.33mL盐酸,用水稀释至100mL,混匀。
A.2.140.05mol/LMES-TRIS缓冲液:称取19.52g2-(N-吗啉代)乙烷磺酸和12.20g三羟甲基氨基甲烷,
用1.7L水溶解,20°C时用6mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8.3,加水稀释至2L。
A.2.15蛋白酶溶液:用0.05mol/LMES-TRIS缓冲溶液配置成为50mg/mL的蛋白酶溶液,使用前现配并
于0℃~5℃暂存。
A.2.16有机系滤膜:0.45μm;
A.2.17氩气或液氩:纯度≥99.99%;
A.2.18氦气:纯度≥99.99%。
A.3标准品
A.3.1硒代胱氨酸(SeCys,CHNOSe,M=334.09,CAS号:29621-88-3):纯度≥98%,或采用经国家
2612242
认证并授予标准物质证书的单标准贮备液。
A.3.2甲基-硒代半胱氨酸(L-SeMc,CHNOSe,M=182.08,CAS号:26046-90-2):纯度≥98%,或采用
492
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