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几种常用鉴别和选择培养基的配制

一、目的要求

了解选择培养基和鉴别培养基的配制原理。

学习和掌握马丁培养基、含氨苄青霉素的LB培养基及伊红美蓝琼脂培养基的配制方法。

二、基本原理

马丁培养基及含氨苄青霉素的LB培养基两者均属选择培养基。马丁培养基常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素(30u／m1)不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G+细菌生长，而链霉素对多数G-细菌具抑制生长作用。所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响．从而达到分离真菌的目的。含氨苄青霉素的LB培养基在基因工程研究中常用于筛选具有氨苄青霉素抗性的菌株。培养基中含有一定浓度(100μg/ml培养基)的氨苄青霉素，它能杀死培养基中一切不抗氨苄青霉素的细菌，而只有对氨苄青霉素具有抗性的细菌才能正常生长繁殖，从而达到快速筛选氨苄青霉素抗性菌株的目的。

伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。

三、实验材料

(一)药品

葡萄糖、蛋白胨、KHP0·3HO、MgSO·7HO，胰蛋白胨，酵母提取物，NaCl、

2 4 2 4 2

乳糖、KHP0、伊红、美蓝、琼脂等。

2 4

(二)溶液

0.1％孟加拉红溶液、链霉素溶液(10000u／m1)、2％去氧胆酸钠溶液、氨苄青霉素溶液(25mg／m1)、2％伊红溶液、0.5％美蓝溶液、1mol/lNaOH、1mol/lHCl溶液等。

(三)仪器

天平、高压蒸汽灭菌锅等。

(四)玻璃器皿

移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

(五)其他物品

药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。

四、实验内容

(一)马丁培养基的配制1．培养基成分

葡萄糖 1g

蛋白胨 0.5g

KHP0·3HO 0.1g

2 4 2

MgSO·7HO 0.05g

4 2

0.1％孟加拉红溶液 0.33ml

琼脂 1.5-2g

蒸馏水 100ml

2％去氧胆酸钠溶液 2ml（预先灭菌，临用前加入）

链霉素溶液(10000u／m1) 0.33ml（临用前加入）自然pH

配制方法

称量 称取培养基各成分的所需量。

溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量，然后依次逐一溶化培养基各成分。按每100ml培养基加入0.33m1的0.1％孟加拉红溶液。

定容 待各成分完全溶化后，补足水量至所需体积。(4)加琼脂 加入所需琼脂量，加热融化，补足失水。(5)分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

临用前，加热融化培养基，候冷至60℃左右，按每100m1培养基无菌操作加入2m1的2％去氧胆酸钠溶液及0.33m1的链霉素溶液(10000u／m1)，迅速混匀。

(二)含氨苄青霉素的LB培养基的配制1．培养基成分

胰蛋白胨

酵母提取物

1g

0.5g

NaCl

1g

琼脂

1.5-2g

蒸馏水

100ml

氨苄青霉素溶液(25mg／m1)

0.4ml（临用前加入）

pH

7.0

2．配制方法

称量 称取培养基各成分所需量，置于烧杯中。

溶化 加入所需水量2／3的蒸馏水于烧杯中，搅拌使药品全部溶化。(3)调PH。

定容。

加琼脂 融化并补足失水。

分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌 100Pa灭菌20min。

临用前，加热融化培养基，候冷至60Dc左右，按每100mI培养基无菌操作加入0.4m1氨苄青霉素溶液(25mg／m1)，迅速混匀。

(三)伊红美蓝(EMB)培养基的配制1．培养基成分

乳糖 1g

胰蛋白胨 0.5g

NaCl 0.5g

KHP0 2g

2 4

2％伊红溶液 2ml

0.5％美蓝溶液 1ml

琼脂 1.5-2g

蒸馏水 100ml

自然pH或pH 7.2

2．配制方法

称量 称取培养基各成分所需量

溶化 在烧杯中加入约2／3所需水量、依次逐逐一溶化培养基各成分。(3)定容。

调pH。

按每100m1培养基加入2m12％伊红溶液和1ml0.5％美蓝溶液。(6)加琼脂 加热融化并补足失水。

分装、加塞、包扎。

高压蒸汽灭菌 100Pa灭菌20min。