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亲和色谱汇报人：AA2024-01-25亲和色谱基本原理亲和色谱固定相与流动相亲和色谱操作方法与步骤亲和色谱在生物大分子分离中应用亲和色谱在药物分析中应用亲和色谱在其他领域应用及前景展望目录01亲和色谱基本原理亲和色谱定义及作用定义亲和色谱是一种利用生物大分子与配体间特异性亲和力进行分离纯化的技术。作用通过亲和色谱技术，可以从复杂的混合物中分离出目标生物大分子，如蛋白质、酶、抗体等，实现高纯度、高活性的分离效果。分离原理与过程分离原理分离过程亲和色谱的分离原理基于生物大分子与配体之间的特异性相互作用，如抗原-抗体、酶-底物、受体-配体等。这种相互作用力比一般的物理或化学作用力更强，因此可以实现高选择性的分离。在亲和色谱中，首先将具有特异性亲和力的配体固定在色谱柱的填料上，然后让待分离的混合物通过色谱柱。目标生物大分子会与配体发生特异性结合，而其他杂质则随流动相流出色谱柱。最后，通过改变流动相的条件，将目标生物大分子从配体上洗脱下来，实现分离纯化。VS适用范围及优缺点适用范围：亲和色谱适用于从复杂的混合物中分离纯化具有特异性亲和力的生物大分子，如蛋白质、酶、抗体等。同时，也可用于研究生物大分子之间的相互作用及其动力学过程。适用范围及优缺点高选择性由于生物大分子与配体之间的特异性相互作用，亲和色谱具有很高的选择性，可以从复杂的混合物中准确地分离出目标分子。高纯度通过亲和色谱分离得到的生物大分子通常具有较高的纯度，可以直接用于后续的生物化学和生物学研究。适用范围及优缺点保持生物活性：亲和色谱在分离过程中能够保持生物大分子的天然结构和活性，有利于后续的功能研究。适用范围及优缺点配体选择困难01针对不同的目标生物大分子，需要选择合适的配体进行分离。然而，寻找和合成具有特异性亲和力的配体是一个复杂且耗时的过程。分离效率低02由于生物大分子与配体之间的结合力较强，导致洗脱过程中需要较高的流动相浓度或更苛刻的条件才能实现目标分子的洗脱。这可能导致分离效率低下，并增加操作难度和成本。填料成本高03亲和色谱柱中的填料通常采用昂贵的材料制成，如硅胶、聚合物等。这使得亲和色谱技术的成本相对较高，限制了其在一些领域的应用。02亲和色谱固定相与流动相固定相类型及选择亲和色谱固定相类型特殊要求主要包括凝胶、多孔玻璃、硅胶、高分子微球等。对于某些具有特殊性质的分离物，如生物大分子、手性化合物等，需要选择具有特定功能的固定相。选择原则根据目标分离物的性质（如大小、形状、电荷等）选择合适的固定相，以实现高效分离。流动相组成与性质010203流动相组成性质要求优化策略一般由缓冲液、有机溶剂等组成，用于调节色谱系统的pH值、离子强度等。流动相应具有良好的溶解性、稳定性及与固定相的相容性，以保证色谱过程的顺利进行。根据分离效果调整流动相的组成和比例，以提高分离效率和选择性。固定相与流动相相互作用吸附作用01固定相通过吸附作用将目标分离物保留在色谱柱上，实现分离。洗脱作用02流动相通过洗脱作用将目标分离物从固定相上解吸下来，进入检测器进行检测。相互作用力03包括范德华力、氢键、静电作用等，影响色谱过程的保留时间、峰形和分离效果。03亲和色谱操作方法与步骤样品处理与进样方式样品前处理根据目标分析物的性质，选择合适的提取方法，如液液萃取、固相萃取等，对样品进行前处理，以去除干扰物质并富集目标分析物。进样方式根据色谱柱的规格和样品性质，选择合适的进样方式，如直接进样、顶空进样、衍生化后进样等。对于复杂样品，可采用在线富集技术提高检测灵敏度。色谱条件设置与优化色谱柱选择根据目标分析物的性质和分离要求，选择合适的色谱柱，如反相色谱柱、正相色谱柱、离子交换色谱柱等。同时考虑色谱柱的规格（如长度、内径、填料粒径等）和分离效果。流动相选择根据色谱柱的性质和目标分析物的性质，选择合适的流动相，如有机溶剂、缓冲液等。同时优化流动相的组成、pH值、浓度等参数，以获得最佳的分离效果。色谱条件优化通过调整流动相的流速、梯度洗脱程序、柱温等参数，优化色谱分离条件，提高分离度、缩短分析时间和降低检测限。数据采集与处理分析数据采集使用合适的检测器对色谱流出物进行检测，将色谱信号转换为电信号并记录下来。常用的检测器有紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。数据处理对采集到的色谱数据进行处理，包括基线校正、峰识别、峰面积计算等。使用专业的色谱数据处理软件可以方便地完成这些操作。结果分析根据处理后的色谱数据，对目标分析物进行定性和定量分析。通过与标准品比较保留时间和峰面积等信息，可以确定目标分析物的种类和含量。04亲和色谱在生物大分子分离中应用蛋白质分离纯化实例分析抗体与抗原的亲和层析融合蛋白的亲和层析金属螯合亲和层析利用抗原与抗体之间高特异性的相互作用，将目标蛋白质从混合物中分离出来。通过基因工程技