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生物分离工程各种亲和分离方法汇报人：AA2024-01-24亲和层析法免疫亲和层析法金属螯合亲和层析法染料配体亲和层析法共价亲和层析法其他新型亲和分离技术目录contents01亲和层析法CHAPTER原理及特点原理特点利用生物大分子间特异的亲和力进行分离纯化。将具有亲和力的两个分子之一（配体）与固相载体结合，制成亲和吸附剂，装入层析柱。当含有被分离物质的混合物随着流动相通过层析柱时，亲和吸附剂上的配体即与目标分子（如酶与底物、抗原与抗体、激素与受体等）发生特异性结合，形成复合物而被吸附在固相载体上。其他无关物质则随流动相流出。通过改变流动相条件，可使复合物解离，将目标分子洗脱下来，达到分离纯化的目的。高选择性、高分辨率、高回收率、操作简便、快速且易于放大。载体选择与制备载体选择常用的亲和层析载体有琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、葡聚糖凝胶等。选择时应考虑载体的孔径大小、机械强度、化学稳定性以及与配体的相容性等因素。制备将选定的载体进行预处理，如清洗、干燥等。然后将配体与载体通过共价键或非共价键结合，形成亲和吸附剂。制备过程中应注意控制反应条件，以确保配体的活性和载体的稳定性。操作条件优化流动相选择根据目标分子的性质选择合适的流动相，如缓冲液的类型、pH值、离子强度等。同时，应考虑流动相的流速和温度等因素对分离效果的影响。洗脱条件通过改变流动相的组成或添加特定的洗脱剂，使复合物从亲和吸附剂上解离下来。洗脱条件的选择应根据目标分子与配体的结合力强弱以及洗脱剂的种类和浓度等因素进行优化。应用实例分析酶与底物的分离利用酶与底物之间的特异性亲和力，将酶固定在亲和层析柱上，实现酶与底物的分离纯化。例如，利用葡萄糖淀粉酶与淀粉之间的亲和力，可将葡萄糖淀粉酶从混合物中分离出来。抗原与抗体的分离将抗原或抗体固定在亲和层析柱上，利用抗原与抗体之间的特异性结合力，实现抗原与抗体的分离纯化。这种方法在免疫学研究中具有广泛应用，如单克隆抗体的制备和纯化等。激素与受体的分离利用激素与受体之间的特异性亲和力，将激素或受体固定在亲和层析柱上，实现激素与受体的分离纯化。这种方法在生物医学研究中具有重要应用，如研究激素的生物活性和作用机制等。02免疫亲和层析法CHAPTER原理及特点原理利用抗原与抗体之间的特异性结合作用，将目标物质从混合物中分离出来。特点高选择性、高灵敏度、高分辨率、操作简便等。抗体选择与制备抗体选择选择与目标物质具有高度特异性和亲和力的抗体。抗体制备通过免疫动物、细胞培养或基因工程等方法制备抗体。操作条件优化流动相选择选择适当的缓冲液和添加剂，以提高分离效果和稳定性。洗脱条件优化洗脱液的组成和浓度，以实现目标物质的有效洗脱。温度控制控制层析过程中的温度，以维持抗体的活性和稳定性。应用实例分析蛋白质分离纯化生物药物分析利用免疫亲和层析法从细胞提取物或发酵液中分离纯化目标蛋白质。用于生物药物中杂质或相关物质的检测和分析。临床诊断环境监测用于疾病标志物的检测和分析，如肿瘤标志物、病毒抗原等。用于环境中污染物或有害物质的检测和分析，如农药残留、重金属离子等。03金属螯合亲和层析法CHAPTER原理及特点原理利用金属离子与特定氨基酸（如组氨酸）之间的亲和作用，将目标蛋白质与金属离子螯合的层析介质结合，实现蛋白质的分离纯化。特点高选择性、高分辨率、操作简便、可重复使用。金属离子选择与螯合剂设计金属离子选择常用的金属离子有Cu2+、Zn2+、Ni2+等，它们与组氨酸等氨基酸的亲和力不同，可根据目标蛋白质的特性和需求选择合适的金属离子。螯合剂设计螯合剂需要具备与金属离子形成稳定螯合物的能力，同时保持一定的空间构象以便于与目标蛋白质结合。常用的螯合剂有IDA（亚氨基二乙酸）、NTA（次氮基三乙酸）等。操作条件优化金属离子浓度缓冲液pH值洗脱条件金属离子浓度过高可能导致非特异性吸附，过低则可能影响结合效率，需要通过实验确定最佳浓度。缓冲液pH值影响金属离子与氨基酸的亲和作用，一般需要在目标蛋白质的等电点附近进行调整。洗脱剂的种类和浓度需要根据目标蛋白质与金属离子的结合力进行选择，以实现高效洗脱。应用实例分析实例二采用Zn2+-NTA金属螯合亲和层析法从发酵液中分离纯化含有半胱氨酸标签的酶蛋白。实例一利用Cu2+-IDA金属螯合亲和层析法从细胞裂解液中分离纯化含有组氨酸标签的重组蛋白质。实例三运用Ni2+-NTA金属螯合亲和层析法从植物提取物中分离纯化特定功能的蛋白质。04染料配体亲和层析法CHAPTER原理及特点原理特点利用染料与生物大分子之间的特异性相互作用，将目标物质从混合物中分离出来。高选择性、高分辨率、操作简便、可重复使用。VS染料类型与选择依据要点一要点二染料类型选择依据活性染料、酸性染料、碱性染料等。染料的颜色、溶解度、稳定性、与目标物质的结合能力等。