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猪轮状病毒NSP4基因原核与真核表达载体的构建及其表达研究的中期报告
本文中期报告旨在介绍猪轮状病毒NSP4基因的原核与真核表达载体的构建及其表达研究的进展情况。
1.实验目的
研究猪轮状病毒NSP4基因在原核与真核表达载体中的表达情况，为进一步研究NSP4基因的生物学功能奠定基础。
2.实验设计
2.1基因克隆及载体构建
采用PCR方法从猪轮状病毒的cDNA模板中扩增得到完整的NSP4基因，并通过克隆构建到原核表达载体pET-30a(+)和真核表达载体pCDNA3.1(+)中。
2.2基因表达
原核pET-30a(+)-NSP4载体及真核pCDNA3.1(+)-NSP4载体分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)和293T细胞中进行表达。采用SDS分析表达蛋白的大小及含量，Westernblot法检测NSP4蛋白的特异性。
3.实验结果
3.1基因克隆及载体构建
通过PCR扩增得到了完整的NSP4基因，并成功构建到原核表达载体pET-30a(+)和真核表达载体pCDNA3.1(+)中，验证结果如图1所示。
图1NSP4基因克隆及载体构建验证结果
3.2基因表达
将原核pET-30a(+)-NSP4载体及真核pCDNA3.1(+)-NSP4载体分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)和293T细胞中进行表达后，采用SDS分析表达蛋白的大小及含量，如图2所示。
图2NSP4蛋白表达情况
Westernblot法检测NSP4蛋白的特异性，如图3所示。
图3NSP4蛋白的特异性检测结果
4.结论
本研究成功构建了猪轮状病毒NSP4基因的原核与真核表达载体，并在BL21(DE3)和293T细胞中成功表达NSP4蛋白。进一步的研究将筛选出适宜的表达条件，探讨NSP4蛋白的生物学功能。
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