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南京工业大学-生物分离工程chapter4细胞破碎

汇报人：AA

2024-01-24

细胞破碎概述

机械法细胞破碎

非机械法细胞破碎

细胞破碎效果评价

细胞破碎实验操作与注意事项

细胞破碎技术应用案例

目录

细胞破碎概述

细胞破碎是指通过物理、化学或生物方法将细胞壁或细胞膜破坏，释放细胞内含物的过程。

定义

获取细胞内的目标产物，如蛋白质、酶、核酸等，以便进行后续的分离纯化工作。

目的

机械法

物理法

化学法

生物法

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包括研磨、高压匀浆、超声波破碎等，通过机械力作用使细胞破裂。

包括渗透压冲击、冻融法、微波法等，通过改变细胞内外环境或施加物理力使细胞破裂。

包括酸碱处理、表面活性剂处理等，通过化学试剂的作用使细胞壁或细胞膜破坏。

包括酶解法等，通过生物酶的作用使细胞壁或细胞膜分解。

发酵工程

基因工程

酶工程

细胞工程

在发酵过程中，细胞破碎可用于释放胞内产物，提高产物提取效率。

在酶的生产和应用中，细胞破碎可用于提取胞内酶，提高酶活性和稳定性。

在基因表达过程中，细胞破碎可用于获取目标蛋白质或核酸。

在细胞培养和治疗中，细胞破碎可用于获取细胞内的有用成分，如细胞因子、抗体等。

机械法细胞破碎

利用高速旋转的搅拌器叶片对细胞施加强烈的剪切力，使细胞破裂释放出内含物。

高速搅拌器，由电机、搅拌器叶片、容器等部分组成。

设备

原理

原理

将细胞与一定大小和密度的玻璃珠或钢珠一起放入珠磨机中，通过高速旋转使珠子产生强烈的撞击和摩擦，从而破碎细胞。

设备

珠磨机，主要由研磨室、珠子、驱动装置等部分组成。

将细胞悬浮液在高压下通过狭窄的缝隙，使细胞受到强烈的剪切力、撞击力和空穴效应而破碎。

原理

高压均质机，由高压泵、均质阀、冷却系统等部分组成。

设备

非机械法细胞破碎

原理

利用高渗溶液使细胞内的水分子向外渗出，细胞体积缩小，细胞壁破裂，从而释放细胞内容物。

应用

适用于细菌、酵母菌等微生物细胞的破碎。常用的高渗溶液有蔗糖、甘露醇等。

原理

通过添加化学试剂改变细胞壁或细胞膜的通透性，使细胞内容物释放出来。

应用

适用于各种类型细胞的破碎。常用的化学试剂有表面活性剂（如SDS）、有机溶剂（如乙醇、丙酮）等。

细胞破碎效果评价

通过显微镜观察细胞破碎前后的形态变化，计算破碎细胞占总细胞数的比例。

显微镜法

颗粒计数法

比浊法

利用颗粒计数器测定细胞破碎前后的颗粒数变化，计算破碎率。

通过比较细胞破碎前后悬液的浊度变化，间接推算破碎率。

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细胞器完整性分析

通过观察细胞器（如线粒体、叶绿体等）在细胞破碎过程中的损伤情况，评价破碎方法的温和性。

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DNA/RNA释放量

通过荧光染料染色后测定DNA/RNA的荧光强度，评价细胞破碎效果。

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酶活性测定

针对特定酶类，通过底物转化速率或产物生成速率来评价细胞破碎效果及酶活性保留情况。

细胞破碎实验操作与注意事项

选择合适的细胞破碎设备，如高压均质机、超声波破碎仪等，并准备好相应的细胞样品。

实验材料准备

确保实验室干净、整洁，符合生物安全要求。准备好实验所需的试剂、耗材等，并进行预实验以熟悉操作流程。

实验室环境准备

检查细胞破碎设备的状态，确保其正常运行。根据实验要求，对设备进行调试，如调整破碎压力、时间等参数。

设备检查与调试

细胞破碎操作

将预处理后的细胞样品放入细胞破碎设备中，按照设定的参数进行破碎操作。注意控制破碎的程度，避免过度破碎导致目标产物的损失。

细胞预处理

对细胞样品进行适当的预处理，如离心去除培养基、清洗细胞等，以便更好地进行细胞破碎。

破碎效果检测

对破碎后的细胞样品进行检测，如显微镜观察、粒径分析等，以评估破碎效果。根据检测结果调整破碎参数，以获得最佳的破碎效果。

实验人员需穿戴实验服、手套、护目镜等个人防护用品，避免直接接触细胞样品和破碎设备。

个人防护

在操作细胞破碎设备时，需严格遵守设备使用说明和安全操作规程，确保设备正常运行并避免意外发生。

设备安全

实验结束后，需妥善处理废弃物，如清洗设备、处理废液等。对于可能含有传染性物质的废弃物，需按照生物安全要求进行处理和处置。

废弃物处理

细胞破碎技术应用案例

提取细胞内有效成分

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通过细胞破碎技术，可以有效地破碎细胞壁和细胞膜，释放出细胞内的有效成分，如蛋白质、酶、抗体等，为生物制药提供原料。

制备细胞疫苗

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细胞破碎技术可用于制备细胞疫苗，如流感疫苗、狂犬疫苗等。通过破碎病毒感染的细胞，提取出病毒抗原，进一步制备成疫苗。

生产基因工程药物

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利用基因工程技术将目的基因导入细胞中，通过细胞培养繁殖出大量含有目的基因的细胞，再利用细胞破碎技术提取出目的蛋白，用于生产基因工程药物。

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在果蔬汁生产过程中，细胞破碎技术可将果蔬细胞破碎，释放出细胞