考研生物化学重点问答题,内附参考答案 .pdfVIP

生物化学问答题（一）

ELISA的基本原理？

答：EILSA主要是基于抗原或抗体能吸附至固相载体的表面并保持其免疫活性，抗原或抗体与酶

形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。在测定时，把受检标本（测定其中的抗

体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固

相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的

量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的

量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

6.ELISA的优点和影响因素？

答：ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标

本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。

影响结果的主要因素：1．试剂的因素:不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。更不

要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。2.样本的因素：内源性干扰因素，包括类风湿因子、补体、

高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等。3.外源性干扰因素：包括标本溶血、标

本被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全等。4．操作中的因素;加样;温育时间、温度的选

择;洗板;显色,结果判定

列出5种常用蛋白质分离和纯化技术，并说明它们分别根据蛋白质的什么特性？

答：（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法

蛋白质的盐析：将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4)有很强

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的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水”，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。

（二）根据蛋白质分子大小的差别的分离方法

1.凝胶过滤法：这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料

是葡萄糖凝胶（Sephadexged）和琼脂糖凝胶（agarosegel）。

2.透析与超滤：透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。

超滤法是利用高压力或离心力，强使水和其他小的溶质分子通过半透膜，而蛋白质留在膜上，可

选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质。

（三）根据蛋白质带电性质进行分离

电泳法：种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以

分开。

（四）根据配体特异性的分离方法－亲和色谱法

亲和层析法（aflinitychromatography）：是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经

过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方

法是根据某些蛋白质与另一种称为配体(Ligand）的分子能特异而非共价地结合。

化学渗透学说的具体内容是什么？

化学渗透学说(chemiosmotictheory)由英国的米切尔(Mitchell1961)提出，

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①由磷脂和蛋白多肽构成的膜对离子和质子具有选择性；②具有氧化还原电位的电子传递体不匀

称地嵌合在膜内；③膜上有偶联电子传递的质子转移系统；④膜上有转移质子的ATP酶。在解释光

合磷酸化机理时，该学说强调：光合电子传递链的电子传递会伴随膜内外两侧产生质子动力，并由质

子动力推动ATP的合成。许多实验都证实了这一学说的正确性。

⒉有哪些方法能获得目的基因？

答：⑴限制性内切酶法；⑵cDNA合成法；⑶人工合成法；⑷（PCR）聚合酶链反应以特异性引

物扩增目的基因。

⒊什么是基因克隆？简述它的主要操作步骤。

克隆是指由一个细胞经过无性繁殖以后所形成的子代群体。基因克隆是指制备DNA片段，并通

过载体将其导入受体细胞，在受体细胞中复制、扩增，以获得单一DNA分子的大量拷贝。进行基因

克隆时所采用的技术就是重组DNA技术，又称为分子克隆技术或基因工程技术。基因工程的主要操

作步骤包括分、切、接、转、筛。

1.简述物质代谢的特点。