编制说明-荧光定量聚合酶反应核酸检测系统.pdf

一、任务来源

根据国家市场监督管理总局2022年国家计量技术规范制定、修订

202270

及宣贯计划（市监计量发〔〕号）立项，由中国计量科学研

究院、北京金域医学检验实验室有限公司和中国农业科学院农业质量

标准与检测技术研究所共同承担《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系

统分析性能验证和确认技术规范》的制定工作。

二、规范修订的必要性

荧光定量PCR方法具有检测速度快、结果重复性高等优势，被

广泛应用于核酸定量和定性的分析过程。荧光定量PCR方法广泛应

用于食源微生物、食品过敏源、转基因食品、乳品等检测。与此同时，

该方法已经在肿瘤诊断、病毒检测、动物疾病检测与筛查以及药物疗

效的评价与考核等方面发挥重要作用，目前国内外的公司研制了多种

PCR[1]

荧光定量仪器。

荧光定量PCR利用荧光标记物的荧光信号积累，实时监测PCR

反应中每一个循环扩增产物的量，通过已知量值的工作标准物质建立

标准曲线对核酸样品进行定量分析。针对RNA定量需要进行逆转录，

RNAcDNAPCR[2]

将逆转录为，再进行荧光定量检测。常用荧光标

记物有TapMan探针、荧光染料等，TaqMan探针为标记有荧光基团

和淬灭基团的一段寡核苷酸序列，能与目的DNA序列特异性结合。

在PCR扩增过程中，荧光基团和淬灭基团分离，产生荧光信号。由

于荧光定量PCR的定量结果依赖于标准曲线，标准曲线显著影响测

[3,4]

量结果的准确性。

荧光定量PCR仪主要由样品载台、热循环部件、控制部件、光

[5]

学经检测部件、电源部件、计算机及应用软件等部件组成。荧光定

量PCR仪在病原微生物检测等领域发挥重要作用。然而在不同实验

室，荧光定量PCR分析性能的验证与确认方法有较大的差异，可能

[6]

会影响测量结果的准确性与可比性。制定《荧光定量聚合酶链反应

核酸检测系统分析性能验证和确认技术规范》，将为荧光定量PCR分

析性能的控制提供参考，提升相关测量结果的有效性，帮助提高医疗

诊断科学性与食品安全性。

三、《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系统分析性能验证和确认技术

规范》制定过程

1.成立起草小组

20221-6

年月《荧光定量聚合酶链反应核酸检测系统分析性能验

证和确认技术规范》，组织成立规范起草小组，包括中国计量科学研

究院、北京金域医学检验实验室有限公司、中国农业科学院农业质量

标准与检测技术研究所、江苏硕世生物科技有限公司，项目正式启动。

2.规范起草

20227-9

年月月，起草小组对国内外相关的标准、文献和规范进

行了调研，根据调研结果，起草了《荧光定量聚合酶链反应核酸检测

系统分析性能验证和确认技术规范》初稿。

20229-12

年月月，起草小组对规范草稿中的技术指标和要求进

行了专家仔细，通过咨询和讨论，进行完善修改。

20231-20241

年月年月，针对确定的技术指标和要求开始实验

验证。并根据验证结果反复修改完善草稿。

3.征求意见

20232

年月，经过起草小组的充分讨论，形成了征求意见稿。开

始面向全国征求意见。

四、规范制定的主要技术依据及原则

（一）依据

本次制订中校准规范文本结构按照JJF1071-2010《国家计量校准

规范编写规则》的要求完成。其中不确定度评定部分按照JJF

1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》要求完成。主要性能指标参

考了JJF1527-2015《聚合酶链式反应分析仪校准规范》、WS/T420《临

床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》、WS/T492《临床检验

定量测定项目精密度与正确