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腺病毒表达系统2024-01-27

腺病毒概述腺病毒表达系统原理腺病毒表达系统应用腺病毒表达系统优势与局限性腺病毒表达系统操作指南安全性考虑与未来发展趋势目录CONTENTS

01腺病毒概述CHAPTER

腺病毒结构与性质无包膜的双链DNA病毒腺病毒是一种无包膜的双链DNA病毒，其基因组大小约为36kb，编码约40个基因产物。病毒衣壳腺病毒的衣壳由252个壳粒组成，分为240个六邻体和12个五邻体，壳粒的排列具有高度对称性。病毒核心腺病毒的核心包含病毒的DNA和一种碱性蛋白，称为核心蛋白，它与DNA紧密结合，起到保护病毒DNA的作用。

根据血清型和基因组的差异，腺病毒可分为A-G七个亚群，目前已发现超过50种不同血清型的腺病毒。腺病毒主要通过呼吸道飞沫、直接接触或粪口途径传播。在人体感染后，病毒可在呼吸道、胃肠道、眼部等组织中复制并引起相应症状。腺病毒分类与传播途径传播途径腺病毒分类

宿主范围腺病毒具有广泛的宿主范围，可感染人类、哺乳动物、禽类等多种生物。细胞感染过程腺病毒感染宿主细胞后，通过内吞作用进入细胞，并在细胞核内复制其DNA。随后，新合成的病毒DNA被转运至细胞质，进行病毒蛋白的合成和组装。最终，成熟的病毒粒子从细胞中释放并继续感染其他细胞。与宿主细胞的相互作用在感染过程中，腺病毒会利用宿主细胞的转录、翻译和复制等机制进行自身基因的表达和病毒粒子的组装。同时，腺病毒感染也会引起宿主细胞的免疫反应，如干扰素的产生和炎症因子的释放等。腺病毒与宿主细胞关系

02腺病毒表达系统原理CHAPTER

基因克隆与重组技术基因克隆通过PCR技术扩增目的基因，并将其克隆到适当的载体中，为后续重组腺病毒的构建提供基础。重组技术利用同源重组或位点特异性重组等方法，将目的基因整合到腺病毒基因组中，实现基因重组。

E1/E3缺失型腺病毒通过删除腺病毒的E1和E3基因，降低病毒在细胞内的复制能力，提高安全性。同时，E1/E3缺失型腺病毒可容纳较大的外源基因片段。复制缺陷型腺病毒在E1/E3缺失的基础上，进一步删除其他必需基因，使重组腺病毒完全丧失复制能力，只能在辅助细胞系中复制。这类腺病毒具有更高的安全性。重组腺病毒构建策略

包装细胞系使用特定的包装细胞系（如293细胞或PER.C6细胞），这些细胞系可提供腺病毒复制所需的E1蛋白等辅助因子，从而实现重组腺病毒的包装。病毒扩增在包装细胞系中培养重组腺病毒，通过细胞裂解或收获上清液等方式收集病毒颗粒，并进行扩增以获得足够的病毒滴度。重组腺病毒包装与扩增

03腺病毒表达系统应用CHAPTER

123利用腺病毒表达系统将正常基因导入患者体内，以替代或修复缺陷基因，从而治疗遗传性疾病。遗传性疾病治疗通过腺病毒表达系统将抑癌基因或自杀基因导入肿瘤细胞，以抑制肿瘤生长或诱导肿瘤细胞凋亡。肿瘤基因治疗利用腺病毒表达系统传递血管内皮生长因子等基因，促进血管新生和心肌再生，治疗心肌梗死等心血管疾病。心血管疾病治疗基因治疗领域应用

利用腺病毒表达系统生产针对特定病原体的预防性疫苗，如新冠病毒疫苗等。预防性疫苗通过腺病毒表达系统传递免疫调节因子或肿瘤相关抗原基因，激发机体免疫应答，达到治疗疾病的目的。治疗性疫苗疫苗开发领域应用

03药物筛选和评价利用腺病毒表达系统构建疾病模型，进行药物筛选和评价，为新药研发提供有力支持。01基因功能研究利用腺病毒表达系统在细胞中过表达或敲除特定基因，研究基因在细胞生长、分化、凋亡等过程中的作用。02细胞信号传导研究通过腺病毒表达系统传递信号通路中的关键因子，研究信号传导通路在细胞生理和病理过程中的作用。基础研究领域应用

04腺病毒表达系统优势与局限性CHAPTER

ABCD优势分析高效转染能力腺病毒能够高效感染多种类型的细胞，包括分裂和非分裂细胞，实现高转染效率。高表达水平腺病毒载体在宿主细胞内的表达水平较高，可产生大量的目标蛋白。大容量外源基因插入腺病毒载体可容纳较大片段的外源基因，有利于表达复杂蛋白或多基因共表达。安全性复制缺陷型腺病毒载体在细胞内不会整合到宿主基因组，降低了基因毒性和致癌风险。

免疫原性腺病毒在体内可能引发免疫反应，影响外源基因的持续表达和治疗效果。细胞毒性高剂量的腺病毒感染可能导致细胞毒性，影响细胞活力和功能。生产难度和成本腺病毒载体的生产和纯化相对复杂，成本较高，限制了其在某些领域的应用。局限性讨论

与逆转录病毒比较逆转录病毒只能感染分裂细胞，而腺病毒可感染分裂和非分裂细胞，具有更广泛的宿主范围。此外，逆转录病毒载体存在随机整合到宿主基因组的风险，可能引发基因毒性，而腺病毒载体则不会整合到宿主基因组。与慢病毒比较慢病毒载体也能高效感染多种类型的细胞，并实现稳定的长期表达。但与腺病毒相比，慢病毒的生产和纯化更为复杂，成本更高。此外，慢病毒载