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中文摘要

基于抗体微珠微流控芯片的外泌体液体活检技术的研究

液体活检是通过对病人体液样本的取样和分析进行疾病诊断和监测的技术，

具有检测方便、可检测疾病类型多、安全、非侵入性和疾病早期即可检测等优

点。外泌体是由大多数细胞分泌的胞外囊泡（Extracellularvesicle，EVs）的一

种亚型，具有脂双层膜结构，是其来源细胞遗传物质和蛋白质的稳定载体，能

够反映癌症的发生和发展状况，并大量存在于血液等体液之中，是液体活检理

想的检测分析物。基于外泌体的液体活检技术在癌症诊断、预后和治疗评价等

方面都具有重要的应用价值和潜力。然而目前基于外泌体的液体活检方法，无

论在外泌体的捕获富集、还是检测方面都存在着操作复杂、耗时长、所需样品

量大、所用化学试剂影响分析结果等局限性，尚无法完全满足临床快速检测和

即时诊疗（Pointofcaretest，POCT）应用的需求。因此，迫切需要研制一种快

速、节省样本、操作简单的集成式的外泌体液体活检方法。

本研究中我们开发了一种基于透明抗体微珠的连续、快速、高效的微流控

外泌体液体活检系统，通过在通道内填充抗体微珠可以扰乱液体样本的层流状

态，明显提高传质效率，增加免疫亲和反应的比表面积，提高抗体与外泌体表

面蛋白的结合效率，同时聚焦荧光信号，显著增强检测的灵敏度。在优化的检

测条件下，该微流控检测方法成功实现了纯外泌体、细胞培养上清中的外泌体

和血浆中肿瘤相关外泌体的快速定量检测。具体主要包括以下几部分内容：

首先，设计并采用压敏键合法（Pressure-sensitiveadhesives，PSA）制作了

基于透明抗体微珠的微流控芯片，在检测腔中填充了表面修饰单克隆抗体的玻

璃微珠，用于外泌体的捕获和富集。

其次，对微流控芯片生物功能进行了表征和验证。以采用商业化试剂盒提

取的纯外泌体和细胞培养上清作为实验样本，与不含外泌体的对照组相比，在

含有外泌体的实验组中检测到了更为明显的荧光信号，说明本研究的方法可以

有效的用于外泌体的检测。

接着，我们通过系统的实验优化了该检测方法的光学参数、免疫结合反应

的条件，以求达到最佳的检测效果。对微流控检测系统的各项生物性能评价的

I

结果表明，该方法具有较好的重现性、稳定性和特异性。

最后，利用该微流控芯片检测了乳腺癌患者和健康志愿者血浆样本中外泌

体的总量、EpCAM阳性的外泌体和MUC1阳性的外泌体的量。结果表明通过检

测这几种外泌体可以将癌症患者和健康志愿者的血样准确的区分开，说明了该

方法在乳腺癌液体活检应用方面的潜力。以受试者工作特征（Receiveroperating

characteristic，ROC）曲线及曲线下面积评估生物标志物的诊断能力，结果表明

多种生物标志物的联合评估具有极高的敏感性和特异性。这一方法的研究和系

统的构建，为基于循环外泌体及其生物标志物的液体活检技术开辟了新途径，

为实现基于外泌体生物标志物的疾病早期检测和诊断提供了一种新方法和新装

置。

关键词：

微流控芯片，外泌体，液体活检，免疫荧光分析法，芯片实验室

II

Abstract

Researchonexosomesliquidbiopsytechnologybasedonantibody

microbeadsfilledmicrofluidicchip

Liquidbiopsyisatechnologyfordiseasediagnosisandmonitoringthroughthe

samplingandanalysisofbodilyfluids,providingadvantagessuchasconvenient

detection,multipledetectability,safety,non-