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核酸提取方法步骤及方法

(1)浓盐法

利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分

离，常用的方法是用1MNacl抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的CCL3一起摇荡,使乳化，再离心除去蛋白质世时蛋白质凝胶停留在水相及CCL3相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.也可用0.15MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白，再按CCL3---异醇法除去蛋白.

两种方法比较，后种方法使核酸降解可能少一些.

以稀盐酸溶液提取DNA时加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用，在氯化钠Nacl溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠，并称SSC溶液，提取DNA.

(2)阴离子去污剂法：

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电弓I力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA.

(3)苯酚抽提法：

苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再

合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.

(4)水抽提法：

利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇，立即用搅拌法搅出.然后分别用66%80%和95%乙醇以及丙铜洗涤