T_SPPHN 002-2023 葫芦科蔬菜小西葫芦花叶病毒检测技术规程.docxVIP

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载ICS?01.040.65

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

CCS?B15/19

T/SPPHN

湖南省植物保护学会团体标准

T/SPPHN?002-2023

葫芦科蔬菜小西葫芦花叶病毒检测技术规

程

Regulation?for?Detection?of?ZYMV?in?Cucurbitaceae?Vegetables

2023-?11-?20?发布 2023-?11-?20 实施

湖南省植物保护学会 发?布

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN?002-2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

前??言

本文件是根据GB/T?1.1-2020?《标准化工作导则?第一部分：标准的结构和起草规则》的要求编制

而成。

本文件由湖南省植物保护研究所提出。

本文件由湖南省植物保护学会归口。

本文件起草单位为湖南省植物保护研究所、中国农业科学院植物保护研究所、宁波大学。

本文件主要起草人：刘勇、孙书娥、张松柏、李方方、史晓斌、罗香文、羊健、燕飞、朱春晖、谭

新球、张卓、张宇。

1

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN?002-2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

葫芦科小西葫芦花叶病毒检测技术规程

1??范围

本文件规定了葫芦科小西葫芦花叶病毒的病原物小西葫芦花叶病毒（Zucchini?yellow?mosaic?virus，

ZYMV）的反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和实时荧光定量PCR（qPCR）检测法检测鉴定的基本

原则和方法。

本文件适用于葫芦科等蔬菜作物小西葫芦花叶病毒的检测和鉴定。

2??规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

SN/T?2964-2011?植物病毒检测规范

3??术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1?小西葫芦花叶病毒病?Zucchini?yellow?mosaic?virus?disease

是指由小西葫芦花叶病毒（Zucchini?yellow?mosaic?virus，ZYMV）引起的一类严重危害植物的病毒

病。蔬菜染病后，病叶出现花叶、斑驳、褪绿黄花、叶面凸凹不平、卷曲畸形、新叶变小等症状。植株

矮化，新梢坏疽，节间缩短，甚至凋萎死亡。果实畸形，果面颜色不均匀或产生褐斑。

3.2?反转录-聚合酶链式反应（Reverse?Transcriptase-Polymerase?Chain?Reaction，RT-PCR）

先利用反转录酶将病毒的RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板，在耐热DNA聚合酶（Taq酶）

和病毒检测引物作用下通过核酸的变性、退火和延伸等交替循环扩增，最后通过电泳观察预期大小核酸

条带的出现与否判定是否存在相关病毒的一种分子生物学检测方法。

3.3?反转录-实时荧光定量?PCR?检测法（Reverse?Transcriptase-Quantitative?Real-time?PCR，RT-qPCR）

2

兔ｗｗｗ．ｂｚｆ学兔ｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN?002-2023

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

学

兔

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

先利用反转录酶将病毒的RNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板，然后在PCR反应体系中加入荧

光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

4??仪器、用具及器材

4.1?主要仪器

冰箱、灭菌锅、电子天平、高通量组织研磨仪、台式冷冻离心机、水浴锅、恒温培养箱、恒温振荡

器、PCR仪、qPCR仪、水平电泳系统、凝胶成像系统等。

4.2?用具及器材

研钵、微量移液器、移液器吸头、镊子、离心管、剪刀、培养皿、PCR管等。

5??检测方法

在以下的两种方法中，均需设置阳性对照和阴性对照。

反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）按附录A执行。

反转录-实时荧光定量PCR检测法（RT-qPCR）按附录B执行。

6??检测结果判定

根据附录A、附录B判定检测结果。检测结果为阳性，即判定该样品含有ZYMV，该样品感染了小

西葫芦花叶病毒病；检测结果为阴性，则判定该样品未被ZYMV侵染，该样品未感染小西葫芦花叶病毒

病。

A

3

学兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ标准下载T/SPPHN?002-2023

学

兔

兔

ｗ

ｗｗ

．ｂ

ｚｆ

ｘｗ

．ｃ

ｏｍ

标

准

下

载

附录?A

（资料性）

反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）