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外周血DNA的提取-盐析法.ppt

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外周血中DNA的提取-盐析法实验步骤1.首先取EDTA抗凝的人外周血500ul,放置10min。实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤谢谢!一、材料准备2.加入2-3倍体积的Bloodbuffer,剧烈震荡15秒,2000rpm/min离心10分钟,弃上清。(重复2-3次)。洗去血浆一些成分3、SE液清洗残余血量:加入300ul的SE液,震荡数次。4.加入10%的SDS30ul,至终浓度0.5%-1%。SDS是离子型表面活性剂,作用:1.破坏细胞膜和核膜2解聚细胞中核酸与蛋白质结合3是蛋白质变性而沉淀下来4抑制DNA酶的活性,使DNA分子尽量完整地分离出来。二、裂解5.悬浮后的溶液中添加蛋白酶K12μL(20mg/ml),轻震。蛋白酶K具有水解蛋白质和DNA酶的作用,并且在EDTA和SDS存在的条件下仍保持较高的活性。三、分离提纯加入1/3体积的过饱和NaCl。2000rpm/min离心15分钟,取上清液移入一新的EP管。可使蛋白质析出。三、分离提纯6.加入2-3倍体积的无水乙醇,沿管壁慢滴入,可见絮状物析出,2000rpm/min离心3分钟.加入无水乙醇可以吸收水相中的水分,使得DNA沉淀析出。四、沉淀或吸附70%酒精漂洗絮状物,弃去酒精,室温自然干燥后,加10ulTE液溶解DNA,4℃冰箱中,备用.五、溶解贮存总步骤

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