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第三章生物材料的预处理、细胞破碎和液-固分离
第一节预处理及固液分离
一、预处理的依据
1、生物活性物资存在方式与特点
胞内
胞外
成分复杂
含量不一
2、后续操作要求
如果后续操作有离子交换法,对无机离子等要求高。
3、目的物的稳定性
有效成分的生理活性不断变化
较稳定物可以用剧烈的变形处理除杂
二、动物材料的预处理
绞肉机
冻融
高压匀浆器
三、发酵液(培养液)的预处理
预处理的目的
?改变发酵液(培养液)的物理性质,以利于固液分离。主要方法有:加热、凝聚与絮凝、
使用助滤剂。
?去除发酵液(培养液)中部分杂质以利于后续各步操作。
预处理的方法
(一)、加热
加热是最简单和经济的预处理方法,即把发酵液(培养液)加热到所需温度并保温适当时
间。加热能使杂蛋白变性凝固,从而降低发酵液(培养液)的粘度,使固液分离变得容易。但
加热的方法只适合对热稳定的生物活性物质。
预处理的方法
(二)、凝聚和絮凝
凝聚和絮凝在预处理中,常用于细小菌体或细胞(分泌胞外产物)、细胞的(分泌胞内产物)
碎片以及蛋白质等胶体粒子的去除。其处理过程就是将一定的化学药剂预先投加到发酵液
(或培养液),改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态,破坏其稳定性,使它们聚
集成可分离的絮凝体,再进行分离。但是应当注意,凝聚和絮凝是两种方法,两个概念,其
具体处理过程也是有差别的。
1.凝聚
凝聚是指在某些电解质作用下,破坏细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态,使胶
体粒子聚集的过程。
凝聚剂主要是一些无机类电解质,由于大部分被处理的物质带负电荷(如细胞或菌体一
般带负电荷),因此工业上常用的凝聚剂大多为阳离子型,分为无机盐类、金属氧化物类。
常用的无机盐类凝聚剂有:Al2(SO4)3?18H2O(明矾)、AlCl3?6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3
等;常用的金属氧化物类凝聚剂有:Al(OH)3、Fe3O4、Ca(OH)2或石灰等。
2.絮凝
絮凝是指使用絮凝剂(通常是天然或合成的大分子量聚电解质),在悬浮粒子之间产生
架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。
常用的絮凝剂有聚丙烯酰胺、聚氧化乙烯、、聚丙烯酸钠和聚苯乙烯磺酸。
影响絮凝效果的因素很多,主要是絮凝剂的分子量,絮凝剂用量,溶液pH,搅拌速度
和时间等。
(三)、使用惰性助滤剂
工业生产中有时需加入某些固体物质,以加速过滤速度,提高滤液质量,这种能提高过
滤速度的物质称为助滤剂
助滤剂的使用方法有两种:①在过滤前先在过滤介质表面预涂(铺)一层助滤剂。②助滤
剂按一定比例均匀加入待过滤的料液中。
常用的惰性助滤剂有硅藻土、珍珠岩、混合助滤剂(硅藻土或珍珠岩与石棉)、纤维
素和活性炭。
助滤剂的选择要点如下:
(1)粒度选择
(2)根据过滤介质和过滤情况选择助滤剂的品种
(3)用量选择
四、去除杂蛋白质的其它方法
1.等电点沉淀
蛋白质在等电点时溶解度最小,能沉淀而除去。
2.变性沉淀
使蛋白质变性的方法有:加热、大幅度改变pH,加有机溶剂(丙酮、乙醇等)、加重金
属离子如Ag+、Cu2+、Pb2+等、加有机酸如三氯乙酸、水杨酸、苦味酸、鞣酸、过氯
酸等及表面活性剂。
3.吸附
在发酵液中,加入一些反应剂,它们互相反应生成的沉淀物对蛋白质具吸附作用而使其
凝固。
预处理的方法
(四)、不溶性多糖的去除
当发酵液中含有较多不溶性多糖时,粘度增大,液固分离困难,可用酶将它转化为单糖
以提高过滤速度。例如在蛋白酶发酵液加α-淀粉酶,将培养基中多余的淀粉水解称单糖,
就能降低发酵液粘度,提高滤速。
预处理的方法
(五)、高价金属离子的去除
对提取和成品质量影响较大的无机杂质主要是Ca2+、Mg2+、Fe3+等高价金属离子,预处
理中应将它们除去。
?去除钙离子,常采用草酸钠或草酸。
?镁离子的去除也可用草酸,但草酸镁溶解度较大,故沉淀不完全,也可采用磷酸盐,
使生成磷酸钙盐和磷酸镁盐沉淀而除去。
?除去铁离子,可采用黄血盐,形成普鲁士兰沉淀:
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