SN_T4853_2-2017转基因大米定量检测 数字PCR法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T4853.2—2017

转基因大米定量检测数字PCR法

第2部分：克螟稻品系

Quantitativedetectionofgeneticallymodifiedrice—DigitalPCR-

Part2:EventKMD

2017-07-21发布

2018-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T4853.2—2017

前言

SN/T4853《转基因大米定量检测数字PCR法》系列标准共分为7部分：

——第1部分：TT51-1品系；

——第2部分：克螟稻品系；

——第3部分：科丰6号品系；

——第4部分：M12品系；

——第5部分：LL62品系；

——第6部分：T2A-1品系；

——第7部分：T1C-19品系。

本部分为SN/T4853标准的第2部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共

和国吉林出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：陈颖、黄文胜、邓婷婷、付伟、韩建勋、李想、朱水芳、吴亚君、聂丹丹。

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SN/T4853.2—2017

转基因大米定量检测数字PCR法

第2部分：克螟稻品系

1范围

SN/T4853的本部分规定了稻谷和大米中克螟稻品系的数字PCR定量检测方法。

本部分适用于稻谷和大米中克螟稻品系特异性的数字PCR定量检测。

本方法的定量检测低限(LOQ)为0.1%(质量分数)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法

GB/T19495.5转基因产品检测核酸定量PCR检测方法

GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法

SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法

3术语和定义、缩略语

3.1术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1.1

SPS基因Thegeneofsucrosephosphatesynthase

蔗糖磷酸合成酶基因，大米单拷贝内参照基因。

3.1.2

克螟稻转化体特异性序列event-specificsequenceofKMD

外源DNA插入受体大米基因组后经重组产生的邻接区序列。具体序列参见附录A。

3.1.3

Taq酶TaqDNApolymerase

源于水生栖热菌的耐热DNA聚合酶。

3.1.4

模板template

数字PCR引物/探针扩增检测的特定DNA片段。

3.1.5

定量检测低限limitofquantification;LOQ

在相对标准差不超过25%的条件下，检测方法所能定量的最低转基因成分百分含量。

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SN/T4853.2—2017

3.1.6

质控样品qualitycontrolsample

具有确定的SPS基因和转化体特异性序列拷贝数的基因组DNA。

3.1.7

微反应体系tinyreactionsystem

将含有模板、引物/荧光探针、耐热DNA复制酶及其缓冲液充分混匀之后分配至体积相同且相互

物理隔离的油包水液滴或其他微孔、微室中所形成的小体积荧光PCR反应体系。

3.1.8

转换系数Conversionfactor

将转化体特异性序列和内参照基因拷贝数之比转换为转基因成分含量(W/W)时所用系数。

3.1.9

荧光标记探针Fluorescentlytaggedprobe

在5末端和3末端分别连接荧光报告基团和淬灭基团的寡核苷酸。PCR扩增时，Taq酶的5-3

外切酶活性将探针水解，使报告基团和淬灭基团分离，从而释放出荧光信号。

3.2缩略语

下列缩略语适用于本文件。

数字PCR:数字聚合酶链式反应(digitalpolymerasechainreaction)

DNA: