《基因工程与细胞工程》质粒DNA的限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切图谱实验.pdfVIP

《基因工程与细胞工程》质粒DNA的限制性酶切及琼脂糖凝

胶电泳鉴定酶切图谱实验

【实验目的】

1、掌握实用的分子生物学基本操作技术；

2、提高处理DNA样品的操作技能；

3、学会使用限制性内切酶对DNA样品进行酶切；

4、学会配制琼脂糖凝胶；

5、学会使用电泳技术分析和鉴定DNA分子。

【实验原理】

1、质粒DNA的限制性酶切

DNA的酶法操作是DNA重组技术中一项最常用的工具。特别是一系列限制

性内切核酸酶的使用，能够在特异性位点切割DNA，对从分子水平上认识基因

的结构与功能和进行重组DNA技术研究是非常有用的。

限制性内切酶来源于细菌，能够在特异性的目标序列中（即限制性酶切

位点）切割双链DNA，从而产生特定的DNA片段（即限制性酶切片段）。内切

酶是细菌限制与修饰体系中的一员，能够使细菌细胞免受外源性DNA的侵害，

即通过切割噬菌体DNA中的特异性位点来限制细菌噬菌体的繁殖，从而抑制

噬菌体对细菌细胞内的入侵。细菌通过修饰限制酶的识别位点来防止限制酶

破坏其自身的DNA，通常是利用对识别位点中1个碱基的甲基化修饰来实现的。

历年来，从细菌细胞内分离纯化的限制性内切酶的种类在不断增加，并越来

越多的被分子生物