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罗非鱼链球菌病研究的实验方案
一、实验流程
采集病鱼→观察记录临床症状→分离纯化病原体→病原体的扩大培养→病原体的药敏试验
↓
动物回归实验
↓
观察记录临床症状
↓
病理组织分析
二、具体操作步骤
1.病鱼录临床症状的观察和记录
记录病鱼的活动特征、外观临床症状，解剖后观察内部器官病变特征，拍照。
2.病原体的分离纯化
对具典型细菌性症状的病鱼进行现场分离，取其脑（）、肝（）、脾（）、
BLS
肾（），采用平板划线法接种于固体培养基中，于℃培养箱中培养
KBHI27-28
24-72h，拍照。将首次分离培养基上数量呈优势的疑似病原菌落进行进一步的分
离纯化培养，对其进行革兰氏染色和镜检步确定其是否为病原菌，拍照。
3.病原体的扩大培养
取上述纯化的菌株单菌落接种于BHI液体培养基中，进行扩大纯培养。
4.病原体的药敏试验
配置固体培养基取菌液均匀涂布于表面干燥后每板贴片
→0.2ml→5mins5
药敏试纸，试纸之间距离不小于反转平板，℃放℃中反转
24mm→430min→37
培养观察抑菌圈拍照
24h→→
5.动物回归实验
将扩大培养病原体的病原体经腹腔注射入罗非鱼，天后开始每天观察发病
6
情况，记录病鱼的活动特征、外观临床症状，解剖后观察内部器官病变特征，拍
照。跟最的病鱼进行比较，看是否症状一致，如果一致，说明分离到的菌株是
致病的病原体，如症状不一致，则病原体分离错误。
6.病鱼病理组织分析（可选）
取病鱼的病变组织（如皮肤、脑、肝、肾脏、脾脏等）进行病理切片分析，
与正常组织对比，拍照，分析病变原因。
三、作业
将上述实验流程和实验结果整理，写成一篇课程作业，图文并茂。
附件：石蜡切片的制作方法
一、取材
用丁香粉麻醉鱼，取病变组织（如皮肤、脑、肝、肾脏、脾脏等），在Bouin
氏液固定8-24小时。取材时应注意以下事项：
所取材料不宜太大以××厘米或××厘米较合适。
1.0.50.50.21.01.00.2
2.切取的组织应能代表整个器官的结构，即器官的各部分结构都能看到。
3.取材时刀要锋利，要注意不要挤压器官以免损伤内部组织。宜轻轻用镊子夹
住，再用剪刀或刀片切下，被镊过的部分不要，切取的材料可稍大些，尤其
是柔软的组织经固定数小时后，待其稍为硬化再修切成小薄片，继续固定。
4.修正组织块时要注意切面平整，作横切面或纵切面要先考虑好，各种组织多
取数块，留有余地，以备必要时应用。
5.固定剂的用量一般为材料体积的10-15或稍多，含水分多的材料，固定液
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