血红蛋白的提取和分离.pptVIP

你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取DNA、血红蛋白？为什么？

分离血红蛋白溶液装配好的凝胶柱3、样品加入与洗脱（1）调节缓冲液面：打开下端出口，使柱内磷酸缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐，关闭出口。（2）滴加透析样品：吸管吸1ml样品加到色谱柱的顶端，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。加样后打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。（3）调节缓冲液面：小心加入pH=7.0的20mmol/l的磷酸缓冲液到适当高度（不断加磷酸缓冲液目的？）（4）洗脱：连接缓冲液洗脱瓶，打开下端出口进行洗脱。（5）收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5ml收集一试管，连续收集。（在分离过程中，如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作成功）三、操作提示

1、红细胞的洗涤洗涤次数过少，；离心速度过高和时间过长会使一同沉淀，达不到分离的效果。2、色谱柱填料的处理商品凝胶是干燥的颗粒，使用前需直接放在洗脱液中膨胀。加速膨胀方法：将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，只需1—2h。优点：，除去凝胶中可能带有的物，排除。4、蛋白质的分离在蛋白质分离过程中，仔细观察红色区带在洗脱过程中的移动情况。如果，说明色谱柱制作成功。快乐每一天练习巩固*DNA双链反向平行3′5′5′3′DNA聚合酶能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。PCR反应需提供的条件缓冲液中进行、DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。5?引物15?引物2第二次复制第一次复制5?5?5?5?5?5?模板DNA5?5?5?5?5?5?5?5?25～30次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。4、循环特点：①PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为三步。②结果单链中有最初母链的条，有个DNA分子含单引物和母链，其它子代DNA分子都为分子③从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于序列，处于两引物之间的DNA序列呈指数增长1×2N体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋引物DNA聚合酶复制特点复制的方向体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋引物一般用DNA片段DNA聚合酶细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温）TaqDNA聚合酶复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。复制的方向子链的5’端向3’端延伸子链的5’端向3’端延伸在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶一小段RNA4、具体过程一、基础知识---蛋白质分离和提取的原理1．分离蛋白质的方法——法:根据分离蛋白质（1）原理：相对分子量大的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程较，移动。相对分子量小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程，移动。（2）凝胶材料：多孔性，类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。（3）分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集分子→收集分子㈡缓冲溶液：1、作用：能够抵制（）对溶液（）的影响，维持PH基本不变。2、目的：为了在实验室条件下准确模拟生物体内的