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金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ检测方法的建立的中期报告

引言：

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus,S.aureus）是一种常见的致病菌，能引起多种疾病，如皮肤感染、食物中毒等。金黄色葡萄球菌肠毒素是引起食物中毒的主要因素，其中肠毒素Ⅰ（StaphylococcalenterotoxintypeI,SEB）具有高毒性和强致病性。因此，对金黄色葡萄球菌中SEB的快速准确检测有着重要的现实意义。

本文旨在建立一种金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ检测方法的中期报告。

材料和方法：

试剂和仪器：

1.GoldviewTM小鼠免疫球蛋白(IgG)试剂盒（金志达生物科技有限公司）

2.酶联免疫仪（Bio-Rad）

3.96孔微孔板（Corning）

4.无酶清洗平板（Corning）

5.大肠杆菌脱内毒素试剂盒（GenScript）

6.GoldviewTM肠毒素Ⅰ酶联免疫试剂盒（金志达生物科技有限公司）

金黄色葡萄球菌的分离和培养：

从食品中分离到的金黄色葡萄球菌，用亚硝酸盐试验、甲氧苄啶紫试验、凝集素试验、草胆原蛋白反应等标准方法进行鉴定和分离纯化，并用10%甘油冻存。

SEB的纯化：

用GibcoBrainHeartInfusionBroth培养金黄色葡萄球菌，并用柱层析法等技术进行SEB的纯化。

SEB的特异性检测：

用GoldviewTM小鼠免疫球蛋白（IgG）试剂盒进行SEB的特异性检测。

方法建立与优化：

1.定量标准曲线法

制备一系列SEB浓度不同的稀释液，分别添加到品种已知的零样中，再进行GoldviewTM肠毒素Ⅰ酶联免疫试剂盒检测，根据OD值绘制标准曲线。

2.变性胁迫法

取稀释液和96孔微孔板，加入GibcoBrainHeartInfusionBroth、大肠杆菌脱内毒素、SEB以及其他辅助试剂，进行变性胁迫反应。

结果：

根据以上方法建立的SEB检测方法，经过实验优化和验证，其检测灵敏度高，特异性高，重复性好，可实现金黄色葡萄球菌中SEB的快速准确检测。