微生物学课件.pptx

菌種的保藏

性狀穩定的菌種是微生物工作最重要的基本要求，否則生產或科研都無法正常進行。影響微生物菌種穩定性的因素：a）變異；b）污染；c）死亡

第一節菌種的衰退和復壯在微生物的基礎研究和應用研究中，選育一株理想的菌株是一件艱苦的工作，而欲使菌種始終保持優良性狀的遺傳穩定性，便於長期使用，還需要做很多日常的工作。實際上，由於各種各樣的原因，要使菌種永遠不變是不可能的，菌種衰退是一種潛在的威脅。只有掌握了菌種衰退的某些規律，才能採取相應的措施，儘量減少菌種的衰退或使已衰退的菌種得以復壯。

一、菌種的衰退菌種衰退（degeneration）是指由於自發突變的結果，而使某物種原有的一系列生物學性狀發生量變或質變的現象。純菌種自發突變突變個體傳代增殖原始個體不純菌種衰退菌種

（一）菌種衰退的現象菌落和細胞形態改變生長速度緩慢，產孢子越來越少代謝產物生產能力下降，即出現負突變致病菌對宿主侵染能力下降對外界不良條件的抵抗能力下降等

（二）菌種衰退的原因基因突變－－主要原因1、有關基因發生負突變導致菌種衰退2、表型延遲造成菌種衰退3、質粒脫落導致菌種衰退連續傳代－－加速衰退不適宜的培養和保藏條件－－加速衰退

（三）菌種衰退的防止控制傳代次數創造良好的培養條件利用不易衰退的細胞移種傳代採用有效的菌種保藏方法講究菌種選育技術定期進行分離純化

二、菌種的復壯狹義的復壯－－消極的措施是指在菌種已經發生衰退的情況下，通過純種分離和測定典型性狀、生產性能等指標，從已衰退的群體中篩選出少數尚未退化的個體，以達到恢復原菌株固有性狀的相應措施。廣義的復壯－－積極的措施是指在菌種的典型特徵或生產性狀尚未衰退前，就經常有意識地採取純種分離和生產性狀測定工作，以期從中選擇到自發的正突變個體。

菌種復壯的主要方法純種分離法菌落純（“菌種純”）細胞純（“菌株純”）通過純種分離,可將衰退菌種細胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細胞分離出來,經擴大培養,就可恢復原菌株的典型性狀。

宿主體內復壯法對於寄生性微生物的衰退菌株，可通過接種到相應昆蟲或動植物宿主體內來提高菌株的毒性。淘汰法將衰退菌種進行一定的處理（如藥物、低溫、高溫等），往往可以起到淘汰已衰退個體而達到復壯的目的。遺傳育種法把退化的菌種重新進行遺傳育種，從中再選出高產而不易退化的穩定性較好的生產菌種。

第二節菌種的保藏菌種是重要的生物資源，研究和選擇良好的菌種保藏方法具有重要的意義。一、菌種保藏的目的菌種保藏的重要意義就在於盡可能保持其原有性狀和活力的穩定，確保菌種不死亡、不變異、不被污染，以達到便於研究、交換和使用等諸方面的需要。

二、菌種保藏的原理首先應該挑選典型菌種的優良純種來進行保藏，最好保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次應人為地創造環境條件（如：乾燥、低溫和缺氧），使微生物長期處於代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態。盡可能多的採用不同的手段保藏一些比較重要的微生物菌株

三、菌種保藏方法各種微生物由於遺傳特性不同，因此適合採用的保藏方法也不一樣。一種良好的有效保藏方法，首先應能保持原菌種的優良性狀長期不變，同時還須考慮方法的通用性、操作的簡便性和設備的普及性。

斜面低溫保藏法石蠟油封藏法砂土管保藏法麩皮保藏法甘油懸液保藏法冷凍真空乾燥保藏法液氮超低溫保藏法宿主保藏法

（一）斜面低溫保藏法－－常用保藏法將菌種接種在適宜的斜面培養基上，待菌種生長完全後，置於4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉接至新的斜面培養基上，生長後繼續保藏，如此連續不斷。此法廣泛適用於各大類微生物菌種的短期保藏此法的主要保藏措施是低溫。一般可保存1～6個月左右。優點是簡便易行，容易推廣，存活率高；缺點是菌株仍有一定程度的代謝活動能力，保藏期短，傳代次數多，菌種較容易發生變異和被汙染。

（二）石蠟油封藏法此法是在無菌條件下，將滅過菌並已蒸發掉水分的液體石蠟倒入培養成熟的菌種斜面（或半固體穿刺培養物）上，石蠟油層高出斜面頂端1cm，使培養物與空氣隔絕，加膠塞並用固體石蠟封口後，垂直放在室溫或4℃冰箱內保藏。此法廣泛適用於各大類微生物菌種的中期保藏不適用於保藏某些能分解烴類的菌種。此法的主要保藏措施是低溫、阻氧。一般可保存1～2年左右。

（三）砂土管保藏法一種常用的長期保藏菌種的方法，適用於產孢子的微生物及形成芽孢的細菌，對於一些對乾燥敏感的細菌及酵母則不適用。砂土管法兼具