第二张基因工程制药目的基因的分离.pdfVIP

第二张基因工程制药

目的基因的分离

本节内容

本节内容

q分离目的基因的方法及原理

q目的基因分离方法的选择原则

q目的基因的序列测定

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第一节分离目的基因的方法及原理

n目的基因的定义：targetgene

n目的基因的定义：targetgene

对基因组中某一基因成分或该基因片段进行研究

对基因组中某一基因成分或该基因片段进行研究

或应用，首先需要通过克隆、扩增以获得该基

或应用，首先需要通过克隆、扩增以获得该基

因，

因，

此基因（或片段）称为目的基因。

此基因（或片段）称为目的基因。

n外源性基因（或DNA）：

n外源性基因（或DNA）：

clonedDNAinvitro

插入至载体、并导入宿主细胞内复制的基因。

插入至载体、并导入宿主细胞内复制的基因。

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nDNA重组技术：

nDNA重组技术：

按照人的意愿在体外对DNA分子进行重组，

按照人的意愿在体外对DNA分子进行重组，

再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中

再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中

扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。

扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝。

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目的基因的来源

§从庞大的基因群中获得某一目的基因的DNA

§从庞大的基因群中获得某一目的基因的DNA

片段要求①纯度高；②数量多

片段要求①纯度高；②数量多

n原核细胞（较易获得目的基因）

n原核细胞（较易获得目的基因）

基因组较小，可直接分离获得

基因组较小，可直接分离获得

基因组限制性内切酶水解成若干

基因组限制性内切酶水解成若干

片段探针筛选提纯扩增

片段探针筛选提纯扩增

5

6

§真核生物：一个单拷贝基因仅占整个基因组的

§真核生物：一个单拷贝基因仅占整个基因组的

-5

-5

10甚至更少，不易获得。

10甚至更少，不易获得。

n真核细胞目的基因的来源根据不同要求选择

n真核细胞目的基因的来源根据不同要求选择

1.构建cDNA文库

1.构建cDNA文库

2.构建基因组文库

2.构建基因组文库

3.人工合成SynthesizeDNAin

3.人工合成SynthesizeDNAin

vitro

vitro

4.PCR扩增

4.PCR扩增

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DNA文库：

DNA文库：

n通过重组、克隆保存在宿主细胞中的

n通过重组、克隆保存在宿主细胞中的

各种DNA分子的集合体。文库保存了该

各种DNA分子的集合体。文库保存了该