鸡场抗体水平检测与解读.pptVIP

鸡场抗体检测与解读

抗体检测周报血凝〔HA〕和血凝(HI)抑制试验-以新城疫为例血凝试验〔HA〕，目的：滴定病毒的血凝效价；原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝〔HA〕,也称直接血凝反响。病毒颗粒红细胞血凝效价测定步骤1.在血凝板上第一排的1－12孔内各参加50ul生理盐水2.在第1孔内参加50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。3.每孔参加1％鸡红细胞悬液50ul4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟5.结果判定结果判定标准：1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，那么l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准抗原，以备凝血抑制试验使用。++++++++++-血凝试验〔HA〕结果判定血凝抑制试验〔HI〕，目的，确定抗体水平；原理：当在病毒的悬液中参加特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，那么红细胞外表的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制〔HI〕反响，也称血凝抑制反响。Iamlate！抗体抗原1、在血凝板上1－12孔内各参加50ul生理盐水；2、在第1孔内参加被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul；3、第1－12孔内参加4个单位血凝抗原50ul〔第12孔为病毒对照〕；4、每孔参加1％鸡红细胞悬液50ul；5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟6、结果判定血凝抑制试验步骤血凝抑制试验〔HI〕结果判定结果判定标准同血凝试验〔HA〕。将反响板倾斜成45度角，沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，说明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：4或HI效价为2(10g2)。(1)一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。(2)鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下，须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。(3)鸡群的HI抗体水平〔血凝抑制滴度〕是以抽检样品的HI抗体效价(log2)的几何平均值表示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(log2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为：〔8×3＋7×5＋6×2〕/〔3＋5＋2〕＝7.1;平均水平在4(10g2)以上，说明该鸡群为免疫鸡群。假设在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，那么不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。(4)大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1％一0.5％，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0％。(5)鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，假设提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；假设HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。〔6〕假设有10%以上的鸡群出现11(log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。假设监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(log2)的鸡群保护率为50%左右；在4(log2)以上保护率达90-100%；在4(log2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为43%。如上表所示：MAX为多个样品中的HI抗体滴度最大值；M