胰岛素的制备.pptVIP

温度诱导表达筛选：挑取转化的单菌落，37℃培养过夜，次日扩大10倍37℃培养3h，42℃诱导4—6h。离心得菌体，适量无菌水悬浮后，取适量菌体悬浮液进行15％SDS—PAGE，以pBV220和pJGl03转化菌液作为对照．DNA序列测定：采用izard?plusMiniprepsDNApurificationSystem提取测序模板，采用Sanger双脱氧终止法，测序反应按Pharmacia公司T7SequencingTMKit说明书进行．6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析．第31页，课件共43页，创作于2023年2月关于胰岛素的制备第1页，课件共43页，创作于2023年2月必要性胰岛素这类活性蛋白多肽和细胞因子居有高度生物活性，分子量很大，立体结构异常复杂，体外难以人工合成。所以过去糖尿病患者只能服用从牛、猪体中提取的胰岛素来治疗；但牛、猪胰岛素结构上与人胰岛素有差别，如与猪胰岛素B链第30个基酸残基不同，长期服用会引起肾和眼的疾病，故必需要用基因工程方法获得重组人胰岛素进行治疗。第2页，课件共43页，创作于2023年2月第3页，课件共43页，创作于2023年2月原理基因工程技术主要内容或步骤可分为目的基因制备和分离，构建DNA重组体；DNA重组体扩增和表达，重组体筛选和鉴定；外源基因表达，产物分离纯