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2015-2016第二学期生物科学实验

（植物基因克隆）实验总结

班级：13级生物科学2班学号：1312022005姓名：邓伟强日期：2016年6月10日

一、实验原理及方法：

实验原理：基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插

入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的

全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关

系。

通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使

人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识，再运用先进的酶学

和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆，育性、高蛋白质

及与植物发育有关的许多基因。

实验方法及过程：

1.CTAB法提取水稻基因组DNA

配制CTAB溶液：

(2gCTAB,3.17gNacl,1mol/LTrisHcl10ml(PH8.0),EDTA4ml,最后定容至100ml.)

配制TBE溶液：

（24gTrisHcl,1.488gNaEDTA.2HO,11g硼酸，最后定容至200ml.）

22

2.配置琼脂糖缓冲液：

10×TBEBuffer配制方法：

每组需要：称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tris：108g

NaEDTA·2HO：7.44g

22

硼酸：55g

向烧杯中加入约800ml的无菌水，充分搅拌溶解。

加无菌水将溶液定容至1L后，室温保存。用时稀释。

3.开发设计引物

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LOC_Os02g42310

Chromosome2:25,442,875-25,450,093

OsSCP8-PutativeSerineCarboxypeptidasehomologue,expressed

OryzasativaJaponica

GCATATGTCAACATCTCATCTCCGTGTTTCTCTTTAGAAAAAAATCAGAACGAGAGTAACAAAACACAACTAGAGGACACATACATATGTAGCTGCTCTGAGGCGCCGTCCCAGTCGAAA

OryzasativaIndica

GCATATGTCAACATCTCATCTCCGTGTTTCTCTTTAGAAAAAAATCAGAACGAGAGTAACAAAACACAACTAGAGGACACATACATATGTAGCTGCTCTGAGGCGCCGTCCCAGTCGAAA

OryzasativaJaponica

GCGCCGGAGACGAAGAGTTGGAAAATTGAAGGGTTGGAAAGTAACTAGCTAGTTTGTTCTCTTTAGGAGAAAGTTTGCACGGTCCAGAGTATAATTTGTGGTGCCTCAGTTTTTTGCTAT

OryzasativaIndica

GCGCCGGAGACGAAGAATTGAAGGGTTGGAAAGTAACTAGCTAGTTTGTTCTCTTTAGGAGAAAGTTTGCACGGTCCAGAGTATAATTTGTGGTGCCTCAGTTTTTTGCTAT

OLIGOstartlentmgc%any3seq

LEFTPRIMER92259.6045.454.000.00AACATCTCATCTCCGTGTTTC

RIGHTPRIMER1682059.7750.005.003.00ACTCTGGACCGTGCAAACTT

Length：201japonica,193Indica

4.PCR反应体系

10×扩增缓冲液：每管：2ul共需：24ul

dNTP混合物：每管：