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小鼠乳腺癌干细胞的分离、培养与鉴定的中期报告
本实验旨在通过分离、培养和鉴定小鼠乳腺癌干细胞，为研究乳腺癌干细胞的分子机制和开发治疗方法提供基础数据。
1.分离小鼠乳腺癌细胞
使用小鼠乳腺癌细胞系4T1，通过消化和筛选分离出干细胞。具体方法如下：
（1）将4T1细胞培养至对数生长期，加入0.25%胰酶消化细胞，振荡5~10分钟，收集细胞。
（2）用筛子分离出细胞，并加热灭菌的PBS洗涤干净。
（3）在黑暗条件下，加入磁珠标记的干细胞表面标志物CD44和CD24的抗体混合液，维持25℃，震荡12小时。
（4）加入磁珠处理，离心吸附的细胞即为干细胞（CD44+/CD24-）。
2.培养小鼠乳腺癌干细胞
将分离出的小鼠乳腺癌干细胞培养在培养基（DMEM/F12+10%FBS+2mML-glutamine+1%penicillin/streptomycin）中，维持37℃、5%CO2、95%相对湿度的培养条件。
观察细胞形态，发现细胞呈球状集落生长，细胞体积变小，细胞核明显。细胞生长速度较快，为小鼠乳腺癌干细胞的特征。
3.鉴定小鼠乳腺癌干细胞
小鼠乳腺癌干细胞的鉴定主要包括肿瘤球形结构形成实验、干细胞标志物表达分析和差异性分化实验。
（1）肿瘤球结构实验：将小鼠乳腺癌干细胞培养于无粘胶聚苯乙烯培养板中，发现细胞呈球状集落生长。
（2）干细胞标志物表达分析：使用流式细胞仪检测细胞的CD44和CD24表达情况。结果表明，小鼠乳腺癌干细胞的CD44+,CD24-表现高度。
（3）差异性分化实验：将细胞培养至对数生长期，加入差异性诱导剂，观察细胞的分化情况，结果表明，小鼠乳腺癌干细胞可进行多种差异性分化操作。
综上，本实验成功分离出小鼠乳腺癌干细胞，并通过肿瘤球实验、干细胞标志物表达分析和差异性分化实验进行了鉴定确认。
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