实验一-酵母呼吸缺陷型选育.ppt

呼吸缺陷型酵母菌株的诱变选育生命科学学院实验目的1、理解呼吸缺陷性酵母的筛选原理；2、掌握呼吸缺陷性酵母的筛选步骤；3、掌握紫外线诱变育种的实验流程。实验原理实验原理2、呼吸缺陷型实验原理实验材料及培养条件实验材料及培养条件思考题1、分析呼吸缺陷型突变株为白色菌落为白色，其它菌株红色、粉红色的机理。2、呼吸缺陷性酵母筛选工作有何现实意义？3、如果白色小菌落分别点种到MM甘培养基和CM培养基上培养后都有生长，讨论有哪些原因？**生物工艺学实验：实验一酵母是一群属于真菌的单细胞微生物真酵母－能产生子囊孢子分为两大类类酵母－不能生成子囊孢子繁殖方式：无性繁殖，少数进行有性繁殖细胞形状：有球形、卵圆形、柠檬形、梨形、腊肠形，也有丝状大小；一般为(1～5)×(5～30)μ1、酵母菌发酵特性：都能发酵葡萄糖、果糖、甘露糖，生成酒精和甘油－有些也能发酵半乳糖－一般不发酵戊糖－一些酵母能全部或部分发酵双糖、三糖(如蔗糖、麦芽糖、乳糖、棉子糖等)用途：生产单细胞蛋白;制取核糖核酸、核苷酸、核黄素、细胞色素C、辅酶A、凝血质、转化酶、乳糖酶等;利用石油原料生产单细胞蛋白、核酸、有机酸;利用味精废液、酒精废液也生产单细胞蛋白呼吸缺陷型酵母菌株是酵母中丧失呼吸能力的突变体,其对非发酵性底物如酒精、醋酸、甘油等不能氧化,酒精脱氢酶活力比野生型高,对酒精发酵有益TP三苯基甲腈3、紫外诱变1)紫外诱变原理2）注意事项3）稀释涂布操作方法1、菌种：酒精酵母2、培养基CM培养基：葡萄糖40gMgSO42g蛋白胨10g琼脂18g酵母膏5g水1000mlKH2PO45gTTC上层培养基葡萄糖5gTTC（红氮四唑）0.5g琼脂10g水1000ml2、培养基MM甘培养基酵母膏6.7g甘油20ml水980mlpH5.5琼脂粉18g实验过程1、培养基配制及灭菌配制实验过程所需培养基并灭菌，并准备诱变时所需各种材料及稀释涂布所需相关材料。2、酵母菌预培养取活化后的酵母菌1环，接入到三角瓶中液体CM培养基，200r/min、30℃振荡培养过夜3、菌悬液制备将培养好的酵母细胞4000r/min离心洗涤3次，调整细胞浓度为106/ml备用，实验过程无菌操作实验过程4、诱变（注意全过程避光）取15-20ml菌悬液于灭菌空白平板内，磁力搅拌器转速为30r/min，调整与紫外灯管距离为20cm，开盖照射45-95s，盖上盖诱变结束及稀释涂布所需相关材料。5、稀释涂布：将诱变后的菌悬液梯度稀释至10-6，于CM平板涂布，避光培养24-36h，选择菌落个数合适的平板备用；实验过程6、点接：将CM培养基平板上长出的菌落点种 TTC下层平板上，30℃培养24-48h；7、鉴定：将TTC上层培养基溶化并冷却（不烫手）后，小心倾入TTC上层培养基上，使其刚好掩埋菌落。等凝固后，30℃培养2～3h。此时，平板菌落颜色会区分成红色、粉红色和白色。呼吸缺陷型突变株为白色菌落。8、复检：用无菌牙签将在TTC鉴别培养基上生长的白色小菌落分别点种到MM甘培养基和CM培养基上。注意点种时，先点MM甘培养基，后点种CM培养基，并在平皿上做好标记。30℃培养24h观察实验结果。1、描述实验结果计算呼吸缺陷性酵母突变率，并分析实验过程中影响诱变效果的因素；2、对比并参照其他小组实验结果，评价本小组实验过程中的利害得失3、计算突变率实验结果分析*