传代培养技术.pptxVIP

原代培养的细胞在瓶壁相互汇合后，需要将其分开至多个新的培养瓶，叫传代。否则因为接触抑制和密度抑制现象，引起细胞衰老，停止生长甚至死亡。LOGO传代细胞培养

1.生长良好的原代细胞，一般经过3-5天左右可形成致密单层。实验步骤

2.倒去原瓶内培养液。3.消化。向培养瓶内加入0.25%的2ml胰蛋白酶消化液浸泡细胞，在37℃下消化1~3min。在倒置显微镜下观察细胞消化变化，当观察到大部分细胞出现胞质回缩、细胞变成圆球形、细胞间隙增大现象时需终止消化。

4.终止消化：加培养液3-4ml，即可终止消化作用。用吸管有序地吹打瓶壁细胞（从瓶底到瓶口，从瓶的一侧到另一侧，注意吹打边角细胞）。打匀后分装。

5.分瓶扩大培养。每瓶再补加2.0毫升培养液，混匀细胞，37℃、5%CO2培养箱中培养。

6．观察。细胞培养24小时后，即可进行观察，观察的重点如下：首先要观察培养细胞是否污染。主要观察培养液颜色的变化及浑浊度。观察培养液颜色变化及细胞是否生长。如细胞已生长，则要观察细胞的形态特征并判断其所处的生长阶段。观察完毕，可用台盘蓝染液对细胞进行染色。以确定死、活细胞的比例。