《吸光光度法工》PPT课件.ppt

编辑课件ppt9.2光度计及其基本部件P2429.2.1分光光度计的类型光电二极管阵列(通常具有316个硅二极管)photodiodearrays(PDAs)同时测量200～820nm范围内的整个光谱,比单个检测器快316倍,信噪比增加3161/2倍.多通道仪器（MultichannelInstruments）其他类型分光光度计将光度计放入样品中,原位测量.对环境和过程监测非常重要.纤维光度计镀铝反射镜纤维光度计示意图纤维光度计9.2.2光度分析的几种方法1.目视比色法观察方向c4c3c2c1c1c2c3c4方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。2.光电比色法通过滤光片得一窄范围的光(几十nm)光电比色计结构示意图灵敏度和准确度较差3.吸光光度法和分光光度计通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光.波长可调,故选择性好,准确度高.光源单色器吸收池检测系统稳压电源分光光度法的基本部件滤光片：有色玻璃片，只允许和它颜色相同的光通过，得近似的单色光。其质量以“半宽度”表示。半宽度：峰高一半处的峰宽。最大透光度的一半处曲线的宽度。选择原则：滤光片的颜色与溶液的颜色互补。滤光片透过的光应是颜色溶液最易吸收的光。722型分光光度计结构方框图光源分光系统吸收池检测系统分光光度计的主要部件光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm)单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。棱镜:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm半宽度5～10nm光栅:波长范围宽,色散均匀,分辨性能好,使用方便。半宽度～0.1nm单色器棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同入射狭缝准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝白光红紫λ1λ2800600500400光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)。原理：利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光.M1M2出射狭缝光屏透镜平面透射光栅光栅衍射示意图吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池1、光洁，2、液2/3处3、手持毛玻璃处4、透光面垂直于光束方向检测器：利用光电效应，将光能转换成电流讯号。 光电池，光电管，光电倍增管指示器： 低档仪器：刻度显示（p)中高档仪器：数字显示，自动扫描记录检测器硒光电池Ag、Au光电管红敏管625-1000nm蓝敏管200-625nm光电倍增管160-700nm1个光电子可产生106～107个电子9.3显色反应与分析条件的选择9.3.1显色剂与显色反应无机显色剂:SCN-[Fe(SCN)]2+H2O2[TiO·H2O2]2+有机显色剂:O生色团：－N＝N－，－N＝O，OC=S,－N（共轭双键）πe：：：：助色团－NH2，－OH，－X（孤对电子）ne有机显色剂OO型：OHCOOHSO3H磺基水杨酸NNNN型：邻二氮菲CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝丁二酮肟ON型：NNNOHOHPARNHNHNSNS型：双硫腙显色反应的选择*灵敏度高，一般ε>104*选择性好显色剂在测定波长处无明显吸收。对照性好,?λmax>60nm.*反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。*显色条件易于控制，重现性好。1.显色剂用量（c(M)、pH一定）9.3.2显色条件的确定c(R)c(R)c(R)Fe(SCN)n3-nMo(SCN)32+浅红Mo(SCN)5橙红Mo(SCN)6-浅红2.显色反应酸度（c(M)、c(R)一定）pHpH1<pH<pH2第九章吸光光度法9.1吸光光度法的基本原理9.2光度计及其基本部件9.3显色反应及显色