高中生物第五章第三节血红蛋白的提取和分离新人教版选修.ppt

血红蛋白提取和分离的程序包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。样品的处理：通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，样品的粗分离:透析→去除分子量较小的杂质样品的纯化：凝胶色谱法→除去相对分子质量较大的杂质蛋白纯度鉴定:聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。3、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？第32页,共36页，2024年2月25日，星期天（三）SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）2.试剂的配制：鉴定血红蛋白纯度。1.目的：3.方法步骤：（略）第33页,共36页，2024年2月25日，星期天观察处理的血液样品离心后是否分层，如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。三、实验结果分析与评价1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？第34页,共36页，2024年2月25日，星期天2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？1、由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。2、加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。3、色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。第35页,共36页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第36页,共36页，2024年2月25日，星期天关于高中生物第五章第三节血红蛋白的提取和分离新人教版选修本课题学习目标体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。1、主要概念：①凝胶色谱法②电泳法③缓冲溶液④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用。主要原理：①凝胶色谱法分离蛋白质的原理②电泳法分离样品的原理③缓冲溶液的组成和作用机理3、课题重点：凝胶色谱法的原理和方法4、课题难点：①样品的处理②色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。第2页,共36页，2024年2月25日，星期天1.分离生物大分子的基本思路：选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。2.蛋白质分离和提取的原理：根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。一、血红蛋白的提取和分离3、提取分离方法凝胶色谱法凝胶电泳法第3页,共36页，2024年2月25日，星期天（一）凝胶色谱法（分配色谱法）2.凝胶：大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶，来进行分离。1.概念：第4页,共36页，2024年2月25日，星期天3.凝胶色谱法的原理①当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;②相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。③依据的特性是：蛋白质分子量的大小。第5页,共36页，2024年2月25日，星期天4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程第6页,共36页，2024年2月25日，星期天凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示

第7页,共36页，2024年2月25日，星期天（二）缓冲溶液1.概念:在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混合溶液。能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维持PH基本不变。2.作用:思考：说出人体血液中缓冲对。NaH2PO4/Na2HPO4H2CO3/NaHCO3第8页,共36页，2024年2月25日，星期天通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。4.提问：在本课题中使用的缓冲液是:__________,利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于