生化试验课件实验八：质粒提取与及琼脂糖凝胶电泳检测.pptVIP

生化试验课件实验八质粒提取与及琼脂糖凝胶电泳检测目录contents实验目的质粒提取琼脂糖凝胶电泳检测结果分析实验总结01实验目的质粒提取是从细菌中分离质粒DNA的方法，其基本原理是利用质粒DNA和宿主染色体DNA在理化性质上的差异，通过一系列的洗涤、裂解、沉淀和离心等步骤，将质粒DNA从宿主细胞中分离出来。质粒提取过程中，需要使用多种化学试剂和设备，如洗涤剂、酶、离心机等，以确保实验结果的准确性和可靠性。掌握质粒提取的基本原理琼脂糖凝胶电泳检测是用于分离和检测DNA片段的一种常用技术，其原理是利用不同大小和电荷的DNA片段在电场作用下迁移速度不同，从而实现分离和检测。琼脂糖凝胶电泳检测过程中，需要选择合适的凝胶浓度和电场强度，以确保实验结果的准确性和可靠性。掌握琼脂糖凝胶电泳检测的原理质粒提取实验操作流程包括菌体培养、细胞收集、细胞裂解、质粒提取和质粒纯化等步骤。琼脂糖凝胶电泳检测实验操作流程包括样品制备、点样、电泳、染色和观察等步骤。在实验操作过程中，需要注意安全和卫生，避免交叉污染和意外事故的发生。了解实验操作流程02质粒提取细胞破碎离心去杂质洗涤与纯化溶解与保存质粒提取的原理01020304通过物理或化学方法破碎细胞，使质粒从细胞中释放出来。通过高速离心去除细胞碎片和染色体DNA等杂质。通过多次洗涤和纯化，进一步去除杂质并浓缩质粒DNA。将质粒DNA溶解于适当缓冲液中，并进行浓度测定和保存。溶解与保存将质粒DNA溶解于适当缓冲液中，测定浓度并进行保存。洗涤与纯化加入洗涤缓冲液，通过离心去除染色体DNA等杂质，进一步纯化质粒DNA。细胞破碎与离心使用物理或化学方法破碎细胞，并通过离心去除细胞碎片。准备工具和试剂准备所需的仪器、玻璃器皿、试剂等。细胞培养与收集将目的细胞培养至对数生长期，并收集细胞。质粒提取的步骤在实验过程中，要确保无菌操作以避免污染。确保无菌操作控制细胞培养条件选择适当的试剂和仪器操作轻柔并避免剧烈搅拌细胞培养条件对质粒提取质量有重要影响，需控制好温度、湿度、pH等条件。根据实验需求选择适当的试剂和仪器，以确保质粒提取的质量和效率。在离心和洗涤过程中，操作要轻柔并避免剧烈搅拌以减少质粒断裂。质粒提取的注意事项03琼脂糖凝胶电泳检测不同大小的DNA片段在电场中的移动速度不同，从而实现分离。琼脂糖凝胶电泳检测通常用于鉴定DNA片段的大小和纯度，以及检测基因突变和多态性等。琼脂糖凝胶电泳检测基于DNA的电荷性质和分子大小进行分离。在电场的作用下，DNA分子根据其大小通过凝胶孔洞移动，形成不同的泳道。琼脂糖凝胶电泳检测的原理将琼脂糖与缓冲液混合，加热溶解后倒入模具中冷却凝固。制备琼脂糖凝胶通过肉眼或凝胶成像系统观察染色后的DNA片段，并记录结果。观察将待检测的DNA样品加入到凝胶的孔洞中。加样在电场的作用下，DNA分子开始在凝胶中移动。电泳向凝胶中加入染色剂，使DNA片段染色。染色0201030405琼脂糖凝胶电泳检测的步骤避免使用过量的染色剂和电泳缓冲液，以防对皮肤和眼睛造成刺激。注意安全保证准确性注意操作规范确保使用的DNA样品质量良好，避免出现杂质和降解。严格按照操作规程进行实验，确保实验结果的准确性和可靠性。030201琼脂糖凝胶电泳检测的注意事项04结果分析观察提取的质粒溶液是否清澈，有无沉淀或杂质，以此判断质粒提取的质量。质粒提取质量使用紫外分光光度计测定质粒DNA的浓度，确保提取的质粒量满足后续实验需求。DNA浓度通过琼脂糖凝胶电泳检测提取的质粒DNA是否完整，是否存在降解现象。完整性质粒提取结果分析琼脂糖凝胶电泳检测结果分析电泳条带观察观察琼脂糖凝胶上的电泳条带，判断DNA片段的大小是否与预期一致。DNA浓度与纯度根据电泳条带的亮度判断DNA浓度，并通过对比标准品判断DNA的纯度。特异性确认所提取的质粒是否具有特异性，与其他背景DNA相区分。