维生素A的含量测定-三点校正法.pptxVIP

维生素A的含量测定---三点校正法利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325～328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。去氢VA(VitA2)去水VA(VitA3)VA氧化产物：环氧化物、VA酸、VA醛VA的光照、聚合产物：鲸醇异构体合成中间体均对测定有干扰，故采用三点校正法1、测定原理：三个波长的吸收度，公式计算校正吸收度，再计算含量。故得名。该法的依据：（1）杂质的无关吸收在310~340nm波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收呈加和性。2、波长的选择：最大吸收波长，及两侧各选一波长（1）等波长差法---直接测定法ChP2020规定，测定维生素A醋酸酯时：?1=328nm，?2=316nm，?3=340nm，△?=12nm（2）等吸收比法---皂化法ChP2020规定测定，测定维生素A醇时：?1=325nm，?2=310nm，?3=334nm，A?2=A?3=6/7A?1 4.测定方法（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯测定）。1）用环己烷溶解，制成9～15IU/ml的溶液2）在300、316、328、340、360nm测定A3）计算Ai/A328，与中国药典的规定值比较。确定计算用的A328或A328校正4）计算①吸光系数②求效价（IU/g）：效价指每1g供试品所含维生素A的国际单位数。IU/g=③求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量%换算因子：单位数值所相当的效价。即：溶剂λmaxVA醋酸酯环己烷328nm1530VA醇异丙醇325nm18201IU=0.344μg全反式VA醋酸酯1IU=0.300μg全反式VA醇维生素A醇维生素A醋酸酯5）A值的选择：测定：用环己烷制成9～15U/ml溶液，测定300nm、316nm、328nm、340nm、360nm处吸光度，分别记为A1、A2、A3、A4、A5。①计算吸光度比值Ai/A328：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值是否超过±0.02。波长300316328340360吸光度比值0.5550.9071.0000.8110.299②判断法a、若λmax在326nm～329nm间a1：│Ai/A328-规定值│≤0.02，按A328计算；a2：│Ai/A328-规定值│有一个或几个超过0.02,计算A328校正=3.52(2A328-A316-A340)及用A328（校正）计算用A328计算皂化法皂化法-15%-3%+3%若a21：若在+3%～﹣3%，则按A328计算a22：若在﹣15%～﹣3%之间，则按A328校正计算a23：若＜﹣15%或＞+3%，则采用皂化法测定。b、若λmax不在326nm～329nm间，则采用“皂化法”测定。（2）皂化法（等吸收比法）分别在?1的两侧各选一点A?2=A?3=6/7A?1?1=325nm，?2=310nm，?3=334nmChP用于测定维生素A醇1）方法精密称取一定量的供试品，加KOH乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经过提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为9～15个国际单位数的溶液，在300、310、325、334nm波长处测定吸收度，并确定最大吸收波长（应为325nm）。2）计算同第一法。见书P342A325校正=6.815A325-2.555A310-4.260A3343）A值的选择①若?max在323-327nm间，且A300/A325≤0.73，按下法判断：A325校正=6.815A325-2.555A310-4.260A334a.若││≤3%，用A325计算b.若││＞3%，用A325校正计算②若?max不在323-327nm之间或A300/A3250.73，表示供试品中杂质含量太高，应采用色谱法将未皂化部分纯化再进行测定。6.讨论1）吸收度校正方法：维生素A醋酸酯：直线方程法（代数法）维生素A醇：相似三角形法（几何法或6/7定位法）2）在应用三点校正法时，除其中一点是在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定之前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对波长是否准确。等波长差法与等吸收比法的区别第一法第二法测定对象维生素A醋酸酯维生素A醇方法