粟酒裂殖酵母中人DJ-1同源基因的表达与转录调控研究.docVIP

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2024-04-01 发布于湖北
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粟酒裂殖酵母中人DJ-1同源基因的表达与转录调控研究.doc

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粟酒裂殖酵母中人DJ-1同源基因的表达与转录调控研究

微生物在自然生存状态下,要面对波动的或突然改变的环境条件,如pH、温度、营养物、潜在的有毒物质、不同类型的射线、过量重金属、氧化物和环境激素类化合物。为了生存和繁殖,对于不同的外界环境压力,粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)会及时的、有针对性的启动相应的基因转录和表达以应对外界环境刺激。

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activaledproteinkinases,MAPKs)是细胞内的一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,它能响应各种胞外和胞内刺激从而被激活,在多种生理反应过程中发挥关键性作用,包括增殖、分化、转化、炎症以及凋亡等。它存在于真核生物的大多数细胞内,从酵母到人类该信号通路都非常保守。

在S.pombe中存在三种MAPKinase信号通路,其中压力激活的Styl信号通路在多种环境胁迫中被激活,比如渗透压、氧化应激、热激或者氮饥饿,调控多种环境刺激情况下基因的表达。DJ-1基因广泛存在于真核生物当中,是一种新的丝裂原依赖的癌基因,该基因表达的蛋白在肿瘤生成、氧自由基的清除和调控雄激素受体等方面都具有重要作用。

在S.pombe中,与人DJ-1同源性最高蛋白是SpDJ-1(SPAC22E12.03c),同源性较远的5个蛋白是Hsp3101(SPCC757.03C)、Hsp3102(SPAC5H10.02C)、Hsp3103(SPBC947.09)、Hsp3104(SPAC11D3.13)、Hsp3105(SPCC1F7.06)且SpDJ-1已经被证实有乙二醛酶Ⅲ(GLO3)活性,说明酵母中的DJ-1参与过氧化物的代谢即在氧化应激下发挥作用。本文在前人的基础上,以粟酒裂殖酵母为模式生物,探究了SpDJ-1的表达与转录调控机制。

首先,敲除SpDJ-1和hsp3105以后酵母菌株在稳态期的活菌数显著下降,而敲除hsp3101-04以后菌株的稳态期却提前到来；其次证明了SpDJ-1受到Styl蛋白的调控而不是Papl;最后,确定了SpDJ-1基因的转录起始位点与TATA-BOX的位置,并通过生物信息学和测lacZ报告基因的方法,尝试分析了SpDJ-1上游启动子调控元件的位置。