DNA提取总结分析和总结.docx

将小麦叶片（约0.1g）放入研钵中，加入液氮冷冻，快速研成粉末后倒入1.5mL离心管中；

每管加入600μLSDSDNA提取液（含2%的巯基乙醇），于65℃水浴30min，其间温和混匀几次；

取出离心管，加入60μL5mol/LKAc，立即上下颠倒温柔混匀（5~6

次），冰上放置20min；

于12,000rpm离心10min；

将上清液（约600μL）转移至新的离心管中，加入4μLRNase，室温放置5min；

(6)加入600μL酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）；(7)于12,000rpm离心15min；

将上清液转移至新的离心管中，记下体积，加入0.6~0.7倍体积的异丙醇，于-20℃下沉淀10~30min；

于10,000rpm离心5min，弃上清，将沉淀用75%乙醇洗2~3次；

挥发干净乙醇，加入50μLddHO，-20℃保存;

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1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

一、实验目的

掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计

和改良植物总DNA抽提方法。

二、实验原理

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶

类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗

类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗

氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethylammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。

氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易

于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl

ammomum bromide，简称为 CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl

sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白

解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质

变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽

提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉

淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。

三、实验材料

水稻幼叶

四、主要试剂配方

2%CTAB抽提缓冲溶液:CTAB4gNaCl16.364g1MTris-HCl20ml(PH8.0)

0.5MEDTA8ml，先用70mlddH2O溶解,再定容至200ml灭菌,冷却后

0.2-1%2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再

加4ml异戊醇，摇匀即可。

五、实验步骤

1.DNA的提取

（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。

（2）取少量叶片（约1g）置于研钵中，用液氮磨至粉状；

（3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动；

（4）将磨碎液分倒入1.5ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之

（4）将磨碎液分倒入1.5ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之

二；（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10min轻轻摇动，40min后取出；（6）冷却2min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3min，使两者混合均匀；（7）放入离心机中10000rpm

二；

（5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10min轻轻摇动，40min后取出；

（6）冷却2min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3min，

使两者混合均匀；

（7）放入离心机中10000rpm离心10