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聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作方法
(一)管型盘状电泳
图8管型盘状电泳槽构造
A为正面B为剖面
(1)别离胶
电泳槽：盘状电泳槽国内有很多单位消费，也可因地制宜，自己制造，槽大多为圆筒形(图9),也有长方形的，上、下槽分别接铂金丝电极，要注意电极到各胶管的间隔相等，以保持各凝胶管的电场一致。
电泳仪：国内消费的型号很多，如北京六一仪器厂的DYY-III型，电压在0?600v内任意调节，电流输出0?100mA，这类电泳仪比较恰当。
玻璃管：选择粗细均一的圆玻璃管，内径5?7mm左右，管长70?100mm。管口用金刚砂磨平，电泳管的清洁很重要，需浸入10%重铭酸盐-硫酸溶液中清洗，再用蒸馏水彻底淋洗干净，在管中滴入丙酮而后枯燥备用。
聚胶架：普通试管架式样，有机玻璃制成，架的孔洞内装一乳胶管，要求乳胶管孔内径与玻璃管外径一样或略小。
微量注射器或微量进样器：加样时，由于需样品量极小，作定量分析时要求样品量准确，因此最好用25.50或100以的微量进样器加样，也可用50或100gl加液器代用。
普通注射器：主要用于灌胶和剥胶，20?30ml，附加10号不锈钢长针头(约10cm长)。
其他：日光台灯，PH计，恒温水浴，烧杯，容量瓶，量筒，试管，漏斗，滤纸，电炉，电子天平等。
甲叉双丙烯酰胺(Bis)；丙烯酰胺(Acr)；四甲基乙二胺(TEMED)；过硫酸铵；核黄素(VB2；三羟甲基氨基甲烷(Tris)；蔗糖；甘氨酸；盐酸等。
丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺产品不纯时需要纯化后才能使用。
(1)丙烯酰胺纯化法：70g丙烯酰胺溶于500ml氯仿中(50°C),热滤，滤液凉后置-20°C冰箱，即有结晶析出，砂芯漏斗过滤，搜集结晶。结晶置于真空枯燥器中减压枯燥，贮棕色瓶中备用。
⑵甲叉双丙烯酰胺纯化法：12g甲叉双丙烯酰胺溶于100ml40?50C丙酮，加热过滤，滤液S-20C冰箱，结晶析出后过滤，并置于真空枯燥器中枯燥，保存于棕色瓶中备用。
凝胶及缓冲液配制系统
有关资料很多，可以根据需要选择适宜的系统。列表4供参考。最常用的是系统1(所谓Davis的标准状态)。各种贮存液配制后，盛于棕色瓶中，贮冰箱备用。用时需测PH值，以检查是否失效。TEMED要密封贮藏。过硫酸铵溶液最好现用现配，不宜超过一周。
表4几种适用电泳的聚丙烯酰胺凝胶系统
DIValign=center
系统I
(PH值8.9)(7.2%)
系统II
(PH值7.5)(7.5%)
系统III
(PH值4.3)(15%)
(1
系统IV
PH值2.9)(7.5%)
溶
液
组份/100m
PH
值
溶
液
组份/100ml
PH
值
溶
液
组份/100ml
PH
值
溶
液
组份/100ml
PH
值
1
1mol/lHCl
克
TEMED
15
1mo;/LHCl
克
TEMED
17
1mol/LKOH
醋酸17.2mlT
EMED
20
1mol/lKOH
醋酸.25ml
TEMED
2a
丙烯酰胺
克
双丙烯酰胺
克
8
2
丙烯酰胺
克
双丙烯酰胺克
6
8
丙烯酰胺
克
双丙烯酰胺克
21
过硫酸铵
克
3
过硫酸铵
克
16
1NH3PO4
克
18
过硫酸铵
克
22
1NKOH
升
醋酸
4a
1NHCl
19
1NKOH
48ml
克
TEMED
醋酸
TEMED
5
丙烯酰胺
克
双丙烯酰胺
克
6
核黄素
7
蔗糖
克
电极缓冲液：
克
甘氨酸克
加水至1升
使用：10%稀释液
电极缓冲液：
二乙基巴比妥克
克
加水至1升
电极缓冲液：
B
加水至1升
使用：10%稀释液
电极缓冲液：
甘氨酸克
醋酸
加水至1升
使用：10%稀释液
电极：上槽接负极?
下槽接正极￡
电极：上槽接负极?
下槽接正极￡
电极：上槽接正极￡
下槽接负极?
电极：上槽接正极￡
下槽接负极?
各溶液混合比
各溶液混合比
各溶液y
晁合比
各溶液混合比
浓缩胶
别离胶
浓缩胶
别离胶
浓缩胶
别离胶
浓缩胶
别离胶
1份4a号
2份5号
1份6号
4份7号
1份1号
2份2a号
1份水
4份3号
1份16号2
份5号
1份6号
4份7号
1份15号
2份2号
1份水
4份3号
1份19号
2份5号
1份6号
4份7号
1份17号
2份8号
1份水
4份18号
1份22号
2份5号
1份6号
4份7号
4份20号
2份2号
2份21
号
蛋白质样品通常是无色的，为了观察和估计样品在凝胶上迁移情况，常加指示剂作为电泳迁移的可见标志。对碱性缓冲系统，一般用漠酚蓝或酚红，对于酸性缓冲系统，一般用甲基绿或次甲基兰。指示剂可直接加在样品中，也可加在电泳槽的缓冲液中，也可加在玻管中。
漠酚蓝通常配制成0.1%的母液备用。
（3）染色剂配
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