孔雀石绿分析和总结.docxVIP

试剂

乙腈(色谱纯)、

二氯甲烷(分析纯)、甲醇(色谱纯)、

超纯水：经0.02μm 滤膜过滤，用前过滤；

0.1mol/ml 硫代硫酸钠溶液；

乙酸盐缓冲液：称取4.95g 无水乙酸钠

及0.95g 对- 甲苯磺酸溶解于950ml 水中，用冰乙酸调节溶液pH 到4.5，最后用水稀释到1L；

20% 盐酸羟胺溶液；

1.0mol/L 对- 甲苯磺酸：称取17.2g 对- 甲苯磺酸，并用水稀释至100ml；

二甘醇(分析纯) ；

中性氧化铝：(80～120 目)；

标准品：孔雀石绿(MG)、无色孔雀石绿

(LMG)，纯度大于97%；

标准溶液：准确称取适量的无色孔雀石绿，用乙腈分别配制成100μg/ml的标准贮备液，再用乙腈稀释配制1μg/ml的标准溶液。于4℃冰箱中避光保存；

标准工作溶液：用乙腈逐步稀释标准贮备溶液，配制成20ng/ml无色孔雀石绿标准溶液

前处理：

称取5.00g 样品于100ml 离心管内，先加入5ml0.1mol/mL硫代硫酸钠溶液，再加入1.5ml20% 的盐酸羟胺溶液、2.5ml1.0mol/L 的对- 甲苯磺酸溶液、5.0ml 乙酸盐缓冲溶液，用匀浆机以10000r/min 的速度均质2min，静置15min。加入10ml 乙腈，漩涡混和2min，4500r/min 离心15min，将上清液转移至另一离心管中。在样品离心管中加入10ml 乙腈，重复上述操作，合并乙腈层。加入5g 中性氧化铝，振荡1min，1500r/min 离心5min，将上清液转入250ml 分液漏斗中。向氧化铝沉淀中加入5ml 乙腈，振荡1min，1500r/min 离心5min，上清液合并至分液漏斗中。向分液漏斗中加入15ml 二氯甲烷、2ml 二甘醇，剧烈振荡1min，静置分层，将二氯甲烷层转移至100ml 的梨形瓶中，再用10ml 二氯甲烷重复上述操作两次，合并二氯甲烷层于100ml 梨形瓶中，于45℃旋转蒸发至近干，用1.5ml 乙腈溶解残渣。将中性氧化铝柱安装在固相萃取装置上，用5ml 乙腈活化。待乙腈液面降至柱床上1～2mm 时，将梨形瓶中的溶液转移到固相萃取柱中，再用乙腈洗涤瓶两次，每次0.5ml，把洗涤液依次通过柱，控制流速不超过1.0ml/min，最后用2ml 乙腈淋洗，收集全部流出液，用乙腈定容至5ml，过0.45μm滤膜，滤液供液相色谱测定。