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(完整版)测定多糖的方法

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(完整版)测定多糖的方法

测定多糖的方法:蒽酮—硫酸法，苯酚—硫酸法，比色定量法，纸色谱法,离子交换色谱法，酶

法,原子吸收法，HPLC法，DNS（还原法），磷钼比色法.

一、苯酚-硫酸法

1、原理：糖在浓硫酸作用下脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物。

在10~100mg范围内其颜色与糖的含量成正比。在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色

法在波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖和多糖的测定方法.简单，灵敏度高，实验室基

本不受蛋白住存在的干扰.

2、实验药品

浓硫酸苯酚

3苯酚溶液的配制

（1）先配制80％苯酚溶液，然后称取80。0g苯酚加20.0g水,使之溶解，置于冰箱中，避光

长期保存。取80％苯酚37.5mL定容到500Ml。配制成60％的苯酚溶液，避光保存。

（2）取苯酚100g，加铝片0。1g和碳酸氢钠0。05g，蒸馏收集182℃馏分。称取7.5g加水

150mL溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

二、蒽酮—硫酸显色法

1、实验药品

蒽酮硫酸

2、溶液的配制

称取蒽酮0。2g，加浓硫酸100mL混均即可（现用现配)

三、高效液相色谱法

多糖溶液进行高效液相色谱，利用TSK—GELG4000PW柱。RI—10A示差折光检测器，以双蒸馏

水为流动相,溶液浓度为0。5mg/Ml，进样量50μL，根据峰形判断样品的纯度。

四、DNS法

为排除还原性单糖的干扰，可采用DNS（3,5—二硝基水杨酸)比色法测定还原糖的含量.

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1、原理在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸与还原性糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一

定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系.再将通过硫酸—苯酚,或者蒽酮—硫

酸法得到的总糖结果减去还原糖，即得较准确的多糖含量.

五、地衣酚—硫酸法

溶液的配制

称取400mg地衣酚（3，5—二羟基甲苯）溶于155mL浓盐酸中，另加45mL含0.33％三氯化铁

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的0。01mol·mL盐酸,临用前配制。

苯酚-硫酸法和蒽酮—硫酸法的缺陷：首先葡萄糖是单糖而植物多糖的组成是多样的，只是用

葡萄糖作为参照不确切，其次，显色试剂的不专属单糖的干扰严重，实际上测得的结果是总糖

的结果.33。5一二硝基水杨酸法（简称DNS法)

DNS法测定原理基于在一定的范围内，还原糖的含量和反应液颜色成比例关系，利用比色法可

测定多糖的含量。对没有还原性的多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行定。还

原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3一

氨基一5一硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利

用分光光度计，在540nm波长下测定吸光度值，查对