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DNA琼脂糖凝胶电泳姓名：徐秀倩学号：3160481导师：吴小芹

实验原理琼脂糖为链状多糖→绳状琼脂糖束→大网孔型凝胶——别离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pHDNAPi，DNA带负电荷，迁移率与分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA线状DNA开环DNA

不同浓度琼脂糖别离DNA分子的范围琼脂糖浓度〔%〕别离范围〔kb〕0.35-600.61-200.70.8-100.90.5-71.20.4-61.50.2-42.00.1-3

琼脂糖凝胶中DNA的观察溴化乙锭〔EB〕—DNA：紫外光下红色荧光

主要实验器材电泳仪电泳槽缓冲液琼脂糖凝胶槽梳子取液器溴酚蓝

电泳槽结构

操作步骤琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极〔黑〕电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相

溶胶

准备胶槽

凝胶冷却至50°C，加EB至终浓度0.5μg/ml

铺胶

凝胶凝固后取出梳子

加缓冲液

准备样品

点样

电泳

注意观察溴酚蓝染液的迁移

紫外灯下观察电泳结果

照相

相关实验对琼脂糖凝胶电泳别离DNA片段的有效性的再认识

琼脂糖凝胶电泳别离DNA片段的根本原理DNA为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动由于不同DNA分子在同一凝胶中迁移速率不一样，电泳一段时间后可将其分开。

材料铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组DNA，按常规提取，置-20℃保存备用。AgaroseⅠ、限制性内切酶EcoRⅤ为上海生工生物工程产品。从凝胶中小量回收DNA片段的试剂盒为上海华舜生物工程产品，1kbDNALadder为MBI产品。

方法琼脂糖凝胶电泳用1×TAE配制0.8%琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为1×TAE，电压为5V/cm，电泳1h，用溴化乙锭或LIGHTBLUEDye显色。

结果电泳后在日光下(LIGHTBLUEDye染色)或在紫外灯下(溴化乙锭染色)切取含“单一”目的DNA分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。

在3个大的目的DNA片段1、2和3(分别约为10、7、4.5kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5kb到100bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUEDye显色)分别切取含有单一目的片段1、2、3的胶条用试剂盒回收DNA分子，为了获得足够量的目的DNA而同时上样4条泳道。

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