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苋菜氢过氧化物裂解酶的纯化及性质研究的中期报告

中期报告内容：

一、前言

苋菜作为一种常见的蔬菜，含有丰富的营养成分，既可作为食物，又可作为中草药治疗多种疾病。同时，苋菜具有广泛的药理活性，已被广泛研究。近年来，对苋菜酶的研究越来越受到关注。本研究旨在纯化苋菜氢过氧化物裂解酶并研究其基本性质。

二、材料与方法

1.实验材料

苋菜叶、丙酮、牛肝酶、氢过氧化物、琼脂糖、酚红.

2.实验方法

（1）制备苋菜提取液

将苋菜叶洗净，切碎，加入适量的磷酸盐缓冲液（pH=7.5），放在0℃下离心10min，收集上清液即为苋菜提取液。

（2）酶的粗提

取苋菜提取液10ml，加入适量的氢过氧化物，放置30min后在0℃下离心10min，收集上清液作为酶的粗提物。

（3）酶的纯化

将酶的粗提物加入DEAE-52离子交换柱，用0.05mol/L-0.5mol/L的NaCl梯度洗脱，收集酶活最高的分离物，再用SephadexG-75柱层析进一步纯化。

（4）酶的鉴定

用琼脂糖酶柱层析，并用牛肝酶校正活性。

（5）酶的基本性质

测定酶的亲和力、分子量、pH优化、温度优化。

三、结果与讨论

1.酶的纯化

经过离子交换柱和凝胶层析柱的纯化后，提取酶活力达到约200U/毫升，纯化效率约为25倍。经过酶柱层析和牛肝酶校正，突出的酶峰被识别为苋菜氢过氧化物裂解酶。

2.基本性质

(1)酶的亲和力

苋菜氢过氧化物裂解酶的亲和力与底物浓度成正相关，呈二次曲线上升趋势。

（2）分子量

运用SDS检测，苋菜氢过氧化物裂解酶的相对分子质量约为56kDa。

（3）pH优化

苋菜氢过氧化物裂解酶在pH7.5-8.0时活性最高，活性的变化呈现Z型曲线。

（4）温度优化

苋菜氢过氧化物裂解酶在40℃时的活性最高，超过40℃后活性开始下降。

四、结论

1.成功纯化了苋菜氢过氧化物裂解酶，纯化效率约为25倍。

2.研究发现，苋菜氢过氧化物裂解酶的相对分子质量约为56kDa，最适pH为7.5-8.0，最适温度为40℃。

3.本研究结果可为进一步探讨苋菜氢过氧化物裂解酶的分子机制提供参考。