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岗位演练聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量1任务九电泳法检定细胞色素C岗位演练
查阅资料，预判各标准蛋白质和待测蛋白质在标准曲线中的位置查阅设计《聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量操作记录》，在任务实施过程中同步填写按实训操作步骤，以SDS法测定蛋白质的分子量设计实操设计（一）任务描述2
（二）实训材料1.材料、试剂标准蛋白混合液、30%凝胶储备液、10%十二烷基硫酸钠（SDS）、分离胶缓冲液（1.5mol/L）、浓缩胶缓冲液（0.5mol/L）、电泳缓冲液（pH8.3）、10%过硫酸铵（新鲜配制）、1%四甲基乙二胺（TEMED）、上样缓冲液、0.25%考马斯亮蓝R-250染色液、脱色液、未知分子量的蛋白质样品（1mg/mL，建议牛血清白蛋白）。2.仪器设备电泳装置：电源、垂直电泳槽、长滴管及微量加样器、烧杯、量筒、培养皿、注射器等。3
（三）实训操作42凝胶的聚合按需要配制分离胶和浓缩胶灌注分离胶，并静置聚合灌注浓缩胶，插入样品模子（梳子），静置聚合后，拔出模子1装板将硅胶框放在平玻璃上，然后将凹型玻璃与平玻璃重叠，立起来使底端接触桌面，夹紧放入电泳槽内，然后插入斜插板到适中程度4加样将玻璃胶室凹面朝里置入电泳槽，添加缓冲液依次在各加样孔内加样3蛋白质样品的处理将15～20mg的标准蛋白样品溶液中，加入15～20mL的样品处理液。在100℃水浴中处理2min，冷却至室温后备用。吸取未知分子量的蛋白质样品20mL，处理方法同上染色、脱色关掉电源，取出胶片，使用考马斯亮蓝染液，染色2～4h，必要时可过夜。弃去染色液，用蒸馏水漂洗胶面。加入脱色液，适时更换脱色液，直至蛋白质带清晰为止。5电泳打开开关，按照实验进展调节电流如室温高，打开电泳槽循环水，降低电泳温度
（四）任务分析测量距离计算样品的相对迁移率绘制标准曲线测定样品的分子量脱色后凝胶板的长度每个蛋白质样品移动距离（蛋白质带中心到加样孔的距离）指示染料迁移的距离相对迁移率=样品迁移距离（cm）/染料迁移距离（cm）各标准蛋白质相对迁移率为横坐标，蛋白质分子量的对数为纵坐标在半对数坐标纸上作图，得到一条标准曲线根据待测蛋白质样品的相对迁移率，从标准曲线上查得该蛋白质的分子量
（五）任务分析与总结通过实训训练，总结一下电泳设备有哪些组成部分，以及各部分在电泳中发挥什么功能。思考电泳操作时，选择电泳方法的依据，试着描述一下琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳各自特点及适宜的应用场景。请分析琼脂糖凝胶电泳时，DNA条带模糊的原因，并分别针对性提出对策。选择题。电泳操作中的过硫酸铵是（）A、控制分子筛孔径B、催化聚合C、加快电泳D、混合均匀E、使条带清晰
锲而舍之，朽木不折;锲而不舍，金石可镂。——《荀子·劝学》
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